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pBluescript II-SK(+)噬菌体展示质粒
基本信息
别名: pBluescript II-SK(+)
复制子: pUC ori,F1 ori
质粒分类: 大肠杆菌载体;克隆质粒
质粒大小: 2961bp
质粒标签: LacZ
原核抗性: 氨苄青霉素Amp(100μg/ml)
克隆菌株: DH5α等大肠杆菌
培养条件: 37℃,有氧,LB
5'测序引物: T7(TAATACGACTCACTATAGGG)
3'测序引物: T3(ATTAACCCTCACTAAAGGGA)
备注: 蓝白斑筛选,产生单链DNA
质粒简介
pBluescript II-SK(+)是大肠杆菌原核质粒。为克隆载体,其来源于噬菌体。该载体常被用在克隆和测序过程中,包括DNA测序中,嵌套缺失的构建;体外RNA转录,定点突变和基因定位。pBluescript II-SK(+)带有21个独特限制性内切酶的识别位点。在MCS区两侧是T7和T3 RNA聚合酶启动子序列,其主要帮助RNA的体外合成。pBluescript II SK(+)和 pBluescript II KS(+) 差异仅仅存在于多克隆位点的方向不同。
Standard cloning vector (phagemid excised from lambda ZAPII). The f1 (+) orientation allows rescue of sense strand ssDNA. pBluescript II KS(+) and pBluescript II SK(+) differ by the orientation of the MCS.
质粒图谱
扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(请务必转化挑单克隆重提后使用)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl 无菌水溶解质粒;
②取2μl质粒加至100μl 感受态中,冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入500μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
④取10μl、100μl复苏液,并分别涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37度培养16h。如果要求是30度则培养20h;
(如果菌落过多,请将质粒稀释后再转化。如果无菌落,请加入10μl质粒离心全涂转化)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌:四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌:穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、平板:直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒:单独提取的液体质粒收到后可直接使用。