产品详情
pVSV-G逆毒包装质粒
基本信息
启动子: CMV,T7
复制子: pUC ori,SV40 ori
终止子: β-globin poly(A) signal
质粒分类: 病毒系列,逆转录病毒包装载体
质粒大小: 6363bp
质粒标签: VSV-G
原核抗性: Amp
克隆菌株: Stbl3
培养条件: 37℃,有氧 LB
表达宿主: 哺乳细胞
诱导方式: 无须诱导,瞬时表达
5'测序引物: CMV-F:CGCAAATGGGCGGTAGGCGTG
3'测序引物: 根据序列设计引物
质粒简介
pVSV-G表示G蛋白的水泡性口炎病毒(VSV-G)的控制下CMV立即早期启动子。VSV-G用于假Moloney Murine Leukenia病毒(MMLV)-介导病毒进入通过逆转录病毒载体VSV-G与磷脂。靶细胞膜的组成部分,并促进病毒和细胞膜的融合。利用不需要的细胞表面受体,可以作为一个替代病毒包膜蛋白。pVSV-G向量包括静脉输液,以提高合成的内含子的mRNA的稳定性,复制和氨苄青霉素抵抗细菌的Col E1起源(Ampr)基因的传播和细菌中抗生素的选择。
质粒图谱
扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(请务必转化挑单克隆重提后使用)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl 无菌水溶解质粒;
②取2μl质粒加至100μl 感受态中,冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入500μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
④取10μl、100μl复苏液,并分别涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37度培养16h。如果要求是30度则培养20h;
(如果菌落过多,请将质粒稀释后再转化。如果无菌落,请加入10μl质粒离心全涂转化)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌:四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌:穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、平板:直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒:单独提取的液体质粒收到后可直接使用。