产品详情
pBT3-C膜蛋白双杂交质粒
基本信息
启动子: CYC1 promoter
复制子: pUC ori,F1 ori,2μ ori
终止子: CYC1 terminator
质粒分类: 酵母细胞质粒;酵母杂交质粒;双杂交类质粒
质粒大小: 7599bp
质粒标签: C-Cub,C-LexA,VP16
原核抗性: 卡那霉素Kan
筛选标记: LEU2
克隆菌株: DH5α等大肠杆菌
培养条件: 37℃,LB,有氧
表达宿主: 酵母菌
培养条件: 30℃,YPD,有氧
备注: 高拷贝
质粒简介
pBT3-C是一个用于膜蛋白酵母双杂交实验的质粒。The DUALmembrane system is intended for the detection and identification of interactions involving integral membrane proteins and membrane-associated proteins in yeast. The DUALmembrane pairwise interaction kit enables you to:
Investigate the interaction between a membrane protein (integral or membrane-associated) and a membrane protein or soluble protein
Map domains or amino acids which are critical for an interaction
Screen cDNA libraries using a membrane protein as a bait to find novel
interacting proteins (requires purchase of a separate cDNA library from Dualsystems)
质粒图谱
扩增流程
收到产品后,请先根据产品管壁标签来判断产品形式,并在扩增前准确查找该质粒的抗性、感受态和培养温度。
1、质粒干粉(请务必转化挑单克隆重提后使用)
①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min,再加入20μl 无菌水溶解质粒;
②取2μl质粒加至100μl 感受态中,冰浴30min后,42℃热激60s,不要搅动,再冰浴2min;
(从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作)
③加入500μl无抗的LB液体培养基,180rpm震荡培养45min;
④取10μl、100μl复苏液,并分别涂布至目标质粒抗性的LB平板上;
(可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布,可以比传统涂布方法获得更多转化子)
⑤将平板正向培养1h,再倒置37度培养16h。如果要求是30度则培养20h;
(如果菌落过多,请将质粒稀释后再转化。如果无菌落,请加入10μl质粒离心全涂转化)
⑥挑取单菌落至LB液体培养基中,加入对应抗生素,220rpm震荡培养14h,根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。
2、甘油菌:四区划线后挑单菌落培养,酵母菌需要先液体复苏再四区划线,再挑单菌落液体培养。
3、穿刺菌:穿刺接种,液体培养后四区划线,再挑单菌落液体培养。
4、平板:直接挑取单菌落至液体培养基中。
5、液体质粒:单独提取的液体质粒收到后可直接使用。