pFastBacHTA昆虫胞内质粒

基本信息

复制子: pUC ori，F1 ori

终止子: SV40 poly(A) signal

质粒分类: 广宿主系列，昆虫细胞载体

质粒大小: 4856bp

原核抗性: Amp

筛选标记: Gen

克隆菌株: DH5α

培养条件: 37℃，有氧 LB

表达宿主: 昆虫细胞

诱导方式: 无须诱导，瞬时表达

5'测序引物: pFastbac-F: TATTCCGGATTATTCATACC

3'测序引物: pFastBac-R: ACAAATGTGGTATGGCTGA

质粒简介

      Bac-to-BacHT Vector Kit 设计用于在大肠杆菌 (E. coli) 中生成杆状病毒载体后，在 Sf9、Sf21 或 High Five 细胞中表达和纯化带组氨酸标签的重组蛋白。 pFastBacHT 载体具有以下特点：1. 用于表达蛋白质的多角体强启动子 2. 用于简化克隆的三个读码框 3.用于轻松纯化重组融合蛋白的 N-端 6xHis 标签 4.用于在蛋白质纯化后去除组氨酸标签的 TEV 蛋白酶切割位点  

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质粒图谱

扩增流程
         收到产品后，请先根据产品管壁标签来判断产品形式，并在扩增前准确查找该质粒的抗性、感受态和培养温度。
        1、质粒干粉（请务必转化挑单克隆重提后使用）
        ①收到质粒干粉后请先5000rpm离心1min，再加入20μl 无菌水溶解质粒；
        ②取2μl质粒加至100μl 感受态中，冰浴30min后，42℃热激60s，不要搅动，再冰浴2min；
（从第二步开始均要在超净工作台中无菌操作）

        ③加入500μl无抗的LB液体培养基，180rpm震荡培养45min；

        ④取10μl、100μl复苏液，并分别涂布至目标质粒抗性的LB平板上；
（可使用本平台的平板涂布专用玻璃珠进行涂布，可以比传统涂布方法获得更多转化子）

        ⑤将平板正向培养1h，再倒置37度培养16h。如果要求是30度则培养20h；
（如果菌落过多，请将质粒稀释后再转化。如果无菌落，请加入10μl质粒离心全涂转化）

        ⑥挑取单菌落至LB液体培养基中，加入对应抗生素，220rpm震荡培养14h，根据实验需要和质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

        2、甘油菌：四区划线后挑单菌落培养，酵母菌需要先液体复苏再四区划线，再挑单菌落液体培养。

        3、穿刺菌：穿刺接种，液体培养后四区划线，再挑单菌落液体培养。

        4、平板：直接挑取单菌落至液体培养基中。
        5、液体质粒：单独提取的液体质粒收到后可直接使用。