产品详情
无RNase的DNase溶液
RNase-free DNase
产品及特点 本产品是从牛胰 DNase 中精制的无 RNase 污染的 DNase,专门用于降
解 RNA 样品中的 DNA 污染,具有下列特点:
1. 高效,能使总 RNA 中的基因组 DNA 污染降低到电泳检测不到的水平。
2. 同时降解单链 DNA 和双链 DNA。
3. 不含 RNase,可以保证 RNA 分子完整性不受任何影响。
4. 反应条件经过优化,可以用于快速降解硅胶膜上吸附的 DNA,也可以用于快速降解液体反应体系中的 DNA。
5. 可以用于总 RNA 提取和体外转录中去除 DNA。也可用于切口平移(NickTranslation)和 DNase 印迹法研究 DNA-蛋白质相互作用。
运输及保存 低温运输,-20℃保存,有效期一年。
自备试剂 超纯水。
使用方法 一、去除 RNA 样品中污染的基因组 DNA(仅供参考,本试剂盒不含
RNase-free DNase 以外的所需试剂)
1. 在一无 RNA 酶的离心管中配制 10 μL 的反应液:
成份 用量
RNA 样品 1 ug
10×DNase Buffer 1 uL
RNase-free DNase(1 U/uL) 1 uL
自备的 RNase inhibitor(40 U/uL) 0.5-1 uL (可不加)
补超纯水到 10 uL
2. 混匀,短暂离心,37℃放置 30 分钟;
3. 加入2 uL 50 mM EDTA 溶液,65℃放置15分钟。此步可以灭活DNase。RNA 在加热时容易水解,也可以使用酚/氯仿抽提去除 DNase,然后再乙醇沉淀 RNA。如果 RNA 在 20ug 以上,也可以使用本公司的 RNAclean试剂盒进行柱式纯化,回收 RNA。
4. 电泳检测是否去除了基因组 DNA,然后进行后续实验。
二、除去硅胶膜离心吸附柱上的 DNA(仅供参考,本试剂盒不含 RNase-freeDNase 以外的所需试剂)
1. 在柱式法提取过程中,完成洗涤步骤。
2. 配制 50 uL DNase 工作液。
成份 用量
10×DNase Buffer 5 uL
RNase-free DNase(1U/uL) 10 uL
自备 RNase inhibitor(40U/uL) 0.5-1 uL(也可不加)
加超纯水到 50 uL
3. 加在离心吸附柱中间,室温放置 5-30 分钟。
4. 加入 0.5 mL 自备洗柱液洗涤两次。
5. 用 RNA 洗脱液洗脱即得无 DNA 的 RNA 样品。
三、除去 RNA 体外转录反应中的 DNA 模板(仅供参考,本试剂盒不含RNase-free DNase 以外的所需试剂)
1. 按 2 U RNase-free DNase/ug DNA 模板的比例在 RNA 体外转录反应中加入 RNase-free DNase。注意:酶的最佳用量也许需要优化。
2. 37℃放置 15 分钟。
3. 加入2 uL 50 mM EDTA 溶液,65℃放置15分钟;此步可以灭活DNase。RNA 在加热时容易水解,也可以使用酚/氯仿抽提去除 DNase,然后再乙醇沉淀RNA。如果RNA 在20 ug以上,也可以使用本公司的RNAclean试剂盒(需另购)进行柱式纯化,回收 RNA。
四、用于切口平移法(Nick Translation)DNA 探针标记(仅供参考,本试剂盒不含 RNase-free DNase 以外的所需试剂)
1. 按下表设置切口平移标记反应:
成份 用量
10×DNA 聚合酶 I 缓冲液 2.5 uL
3 dNTP mixture,1 mM each 1.25 uL
标记核苷酸:非标记核苷酸混合(3:7,1mM) 1 uL
RNase-free DNase(0.002 U/uL,见注) 1 uL
DNA 聚合酶 I(10U/uL) 0.5-1.5 uL
模板 DNA 0.25 ug
加水到 25 uL
注:稀释 RNase-free DNase 的缓冲液为 1×DNA 聚合酶 I 缓冲液:50
mM
2. 15℃放置 15-60 分钟。
3. 加入 10 uL 50 mM EDTA 溶液。
4. 65℃放置 15 分钟灭活酶。
5. 所得探针可以纯化后使用,也可以直接使用。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!