产品详情
液相内毒素清除剂
Liquid endotoxin scavenger
去除液体生物样品(包括质粒DNA样品)中污染的内毒素(endotoxin)具有重要的临床意义,因为内毒素对原代细胞、传代细胞和整体动物均具有显著的毒性作用。由于内毒素(化学本质为脂多糖,即lipopolysaccharides)是包括E.coli在内的革兰氏阴性细菌细胞壁的主要组成成分,并且带电性跟DNA 类似,所以从E.coli细胞中提取的质粒DNA和重组蛋白质药物中常常含有大量的内毒素污染,并且很难用用常规方法(包括硅胶膜吸附,离子交换吸附、凝胶排阻过滤、氯化铯超速离心)去除。本产品就是专门用于高效去除生物样品中的内毒素污染。
产品特点:
1. 简单快速,一次处理只需要20分钟左右,不需要复杂仪器设备。
2.高效,一次处理可以去除90%以上的内毒素,经过三次重复抽提可将内毒素的水平降低到0.2 EU(endotoxin unit,约0.1 ng LPS)/mL以下。
3.适用范围广,可用于DNA、RNA、蛋白质或其他生物样品。
4. 不影响DNA和绝大部分蛋白质的活性,处理过的质粒DNA可用于转染实验。
5. 既可小规模使用(在1.5mL离心管内),也可放量使用。
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
如果使用前本产品有分层,冰浴后振荡混匀。
一:用于体积小于500μl的DNA/RNA样品
1.在一干净的离心管中加入500μl的样品。如果不足500μl,可以用水或TE补足。
2. 加入50μl的3 M 醋酸钠(pH5.2),混匀后冰浴5分钟。
3. 加入50μl预冷的本产品,充分混匀后冰浴10分钟。
4. 65℃水浴直到溶液变浊或出现分层为止(一般需要1-5分钟)
5.室温12000~15000×g离心2分钟(不能低温离心),离心后上层为无色透明,下层为淡蓝色。
6. 将上清转移到新的离心管中。
7. 如果需要,可以重复步骤3~6。
8. 加1倍体积的异丙醇或两倍体积的乙醇,混匀,12000~15000×g离心30分钟。
9. 弃上清后用70%酒精洗2次。
10. 空气干燥沉淀后加入100μl 无内毒素的水或TE缓冲液溶解沉淀。
11. 测定DNA和内毒素的含量,与未纯化的样品比较。
二:用于体积大于500μl的DNA/RNA样品
整个操作同上,只是在15或50mL塑料离心管中进行,离心速度不能超过离心管的承受力。
三:整合到碱变性法质粒DNA 制备过程中
整个操作同上,只是:
1.样品必须是加溶液III离心后得到的上清液或最后得到的质粒溶液。
2. 如果处理的是加溶液III离心后得到的上清液,可以略去第2 步操作。
3.处理后的溶液需要用试剂盒提供的或自备的上柱液调整盐离子浓度,然后上柱,以后的操作按试剂盒提供的操作手册进行。
4. 洗脱DNA 所用水或溶液必须无内毒素污染。
四:对蛋白质和其它生物样品
整个操作同上,只是:
1. 略去第2 步操作,加3 M 醋酸钠(pH5.2)只为沉淀核酸。
2. 第4 步改为37℃保温以免蛋白质变性,溶液呈混浊状或分相一般需要20-30分钟。
3. 略去第8 步和以后操作。
疑难解答:
Q:为何用常规的方法很难去除生物样品中的内毒素?
A:因为内毒素带电性跟DNA和部分蛋白质相同,所以基于带电性的分离方法(如硅胶膜吸附,离子交换吸附)不能将它们分开;同时内毒素又是双性分子(类似于细胞膜的磷脂分子),能够形成大小不等的聚合物,跟质粒DNA和蛋白质大小接近,所以基于分子量大小的分离方法(如凝胶排阻过滤和氯化铯超速离心)也不能将其有效分离。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!