参考价: ¥ 1390
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上海泽叶生物科技有限公司
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产品详情

核酸扩增.jpg

cDNA第二链合成试剂盒

Second Strand cDNA Synthesis Kit

cDNA第二链合成的原理是用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口,再用DNA Polymerase I通过切口平移(nick translation)反应进行RNA链取代合成cDNA第二链。

产品特点:
1. 即开即用,含有合成cDNA第二链的所有试剂。
2. 所得双链cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等。

试剂盒组成:

成分规格
5×cDNA第二链合成缓冲液480μl
20×cDNA第二链合成酶混合液120μl
0.2 M EDTA溶液120μl
超纯水2ml
说明书1份



储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。

使用方法:
一、合成cDNA第一条链
本试剂盒不提供cDNA第一链合成试剂,用户需自备相关试剂合成cDNA第一链。
二、合成cDNA第二链
1.在冰浴上向已经完成合成cDNA第一条链的反应体系中依次加入下表试剂:

成分用量
cDNA第一链合成反应液10μl
超纯水48μl
cDNA第二链合成缓冲液16μl
cDNA第二链合成酶混合液4μl
轻柔吹打混匀后,短暂离心,16℃保温2小时
自备的T4 DNA聚合酶2μl
轻柔吹打混匀后,16℃继续保温30分钟
0.2M EDTA溶液4μl


注:如果不需要将双链cDNA平末端化,则可以跳过T4 DNA聚合酶处理步骤。
2.电泳5μl检测cDNA质量。如果cDNA在0.5-10Kb的范围内呈模糊一片,则cDNA合格。如果没看见cDNA或有其他异常,需查找原因后再继续。
3. 所得cDNA可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库构建、抑制性差减杂交等实验。


特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!