产品详情
miRNA cDNA第一链合成试剂盒
miRNA First Strand cDNA Synthesis Kit
本试剂盒采用在miRNA 3′末端加多聚A 尾的方法来使miRNA 具有Poly(A)尾,之后再使用Oligo(dT)-Tag引物进行逆转录反应,最终合成miRNA 对应的第一链cDNA。其反应流程如下:
产品特点:
1. 两步式操作,先进行Poly(A)加尾,再进行逆转录反应。
2. 只需要1μg的total RNA。
3. 所得cDNA可用于检测多种miRNA,不仅减少了误差、节约了样品,同时还实现了检测的高通量。
4.与miRNA荧光定量PCR 检测试剂盒兼容。
5.特异性好,独特的miRNA引物及反应体系避免了Pre-miRNA的非特异扩增。
试剂盒组成:
储存条件:低温运输,-20℃保存。
使用方法:
一、对miRNA 3′末端进行加Poly(A)处理
1.在冰上预冷RNase-Free的反应管内加入以下试剂至总体积20μL。注意需要最后加入E.coli Poly(A)聚合酶。
注:在反应中使用的Total RNA必须含有miRNA。也可以直接使用miRNA(建议加入量为2–5μL,需根据目的miRNA的丰度决定)。
2. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液,短暂离心后在37℃反应60 min。所得的反应液可以直接进行下游实验(注意:只能把2μL 直接用于后续的RT反应,多于2μL 则需要先乙醇-乙酸钠沉淀,再将加尾后的miRNA 溶于水,然后再取所需量用于RT。如果不经过沉淀,带入的残留的poly(A)聚合酶反应液将会干扰RT反应),也可以放置-20℃短暂保存。如需长期保存建议存放于-80℃。
二、对带Poly(A)尾巴的miRNA进行逆转录反应
3. 按照下表设置20μL体系的RT反应:
4. 移液器轻轻混匀上述配制的反应液,短暂离心后在42℃反应60 min。
5. 70℃保温10 min 终止反应。
6. 合成的cDNA反应液可放置于-20℃保存;也可以暂时冰上放置,立即用于后续的荧光PCR 定量检测,不需要纯化。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!