miRNA荧光定量RT-PCR检测试剂盒

miRNA Realtime qRT-PCR Kit

本试剂盒采用在miRNA 3′末端加多聚A 尾的方法来使miRNA 具有Poly(A)尾，之后再使用Oligo(dT)-Tag引物进行逆转录反应，最终合成miRNA 对应的第一链cDNA。其反应流程如下：
本试剂盒采用SYBR Green I 嵌合荧光染料法的原理来进行miRNA荧光定量PCR检测。本产品是专门为miRNA定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR检测试剂。2×miRNA qPCR Mix包含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂等所有PCR所需要的成分。miRNA qPCR Mix中所含的荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。其中的Taq DNA polymerase是经化学修饰的高效热启动酶，配合独特的缓冲体系，使反应特异性更好，灵敏度更高，并能在更广的范围内对miRNA进行准确定量。

产品特点：
1. 简便、快捷完成miRNA的检测。
2. 检测通量高，只需最少的RNA样本，即可同时进行多种目标miRNA的检测。
3. 检测特异性好，独特的miRNA引物设计技术及其优化的反应体系避免了非特异性扩增、特别是Pre-miRNA的污染。
4. 检测分辨率高：该系统能分辨单碱基差异的miRNA。
5. 检测灵敏度高：可在低至pg级的总RNA中检测到特异表达的miRNA。

试剂盒组成：

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、miRNA cDNA第一链合成
请参见miRNA cDNA 第一链合成试剂盒产品使用说明书。

二、miRNA荧光定量检测
1.室温融化2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer(10μm)。
2. 使用时请将2×miRNA qPCR Mix上下颠倒轻轻均匀混合，避免起泡，并经短暂离心后使用。如果试剂没有混匀，其反应性能会有所下降。
3. 按照下表组分配制荧光定量PCR反应体系：

4. 建议反应程序设置如下：

注意事项：
1. miRNA 第一链cDNA的加入量不要超过Real time PCR 体积10%。
2. 对于特殊的检测体系，高含量的cDNA 模板易导致非特异性扩增，根据所检测miRNA的丰度适当的稀释cDNA(稀释10倍或者100倍)。
3. 2×miRNA qPCR Mix中含有SYBR Green I和ROX染料，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！