产品详情
可视化LAMP试剂盒
Colorimetric LAMP Kit
产品及特点 本试剂盒是本公司通用型 LAMP 试剂盒的升级版,它有下列特点:
1. 将可视化 LAMP 染料和 Bst DNA 聚合酶整合到 2×LAMP MagicMix 中,减少了加样操作,能降低操作误差。
2. 变色式可视化肉眼检测,不需要任何仪器即可肉眼判断是否有扩增。
3. 使用改良的温热启动 Bst DNA 聚合酶,该酶只有在 40℃以上时才有活性,反应特异性更强。
4. 改良的酶既可用于 DNA 为模板的 LAMP 扩增,也可用 RNA 模板的RT-LAMP 扩增。
5. 高扩增效率更高,比 PCR 灵敏一个数量级,可检测到单拷贝的 DNA 分子。
6. 本试剂盒足够 50 次 20μL 体系的 LAMP 扩增,只可用于科研。
运输及保存 低温运输,-20℃保存,免 DNA 提取试剂可以常温保存。有效期一年。本试剂 盒中的 2×可视化 LAMP MagicMix 由于含有 Bst DNA 聚合酶,故不能反复冻 融超过 10 次。如果需要反复冻融 10 次以上,建议收到货后立即分装,一次用 其中一管,减少冻融次数。
自备试剂 LAMP 模板、RT-LAMP 模板及 LAMP 引物
使用方法 1. 制备DNA或RNA样品:用合适的DNA或RNA提取试剂盒提取样品DNA或RNA。本试剂盒含免DNA提取试剂盒试用装(足够处理30个样品)。具体操作见使用方法后的附录。
2. 配制自备的5×LAMP引物混合液。
先加超纯水(不要用TE)将各引物干粉稀释到母液浓度,然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物和超纯水,最后得到1mL的5×LAMP引物混合液。如果需要配制的5×LAMP引物混合液体积大于或小于1mL,则各成分的用量请按比例调整。此混合液可以在-20℃放置2年。
引物名称 母液浓度 加入量 在混合液中浓度
FIP 引物 100 uM 80 μL 8 uM
BIP 引物 100 uM 80 μL 8 uM
F3 引物 100 uM 10 μL 1 uM
B3 引物 100 uM 10 μL 1 uM
Loop F 100 uM 20 μL 2 uM
Loop B 100 uM 20 μL 2 uM
超纯水 780 μL
3. 在新的反应管中设置LAMP反应(PC为阳性对照、NC1为不加模板阴性对照、NC2为不加引物阴性对照。注意:为便于可视化颜色比较,每次实验必须设置至少一个阴性对照。本试剂盒只提供LAMP的阳性对照模板,不提供RT-LAMP的阳性对照模板):
成份 样品管 PC NC1 NC2
2×可视化 LAMP MagicMix 10 μL 10 μL 10 μL 10 μL
自备 5×LAMP 引物混合液 4 μL - 4 μL - 自备模板 DNA 或 RNA 1-100ng - - - LAMP 阳性对照模板-引物混合物 - 4.5 μL - - 补超纯水到 20 μL 20 μL 20 μL 20 μL
4. 混匀,此时反应液呈现非常淡的蓝色。置于60-65℃保温60-120分钟(具体最佳温度跟用户设计的LAMP引物序列相关,一般选择63℃。如果是在PCR仪中保温,必须加热盖。如果用金属浴保温,没有热盖,建议覆盖30μL石蜡油,否则保温期间反应体系的水分会蒸发,影响反应效率)。
5. 80℃10分钟灭活Bst DNA聚合酶。
6. 观察实验结果。将反应管放置在白色背景前观察,观察反应液颜色。阳性对照(PC)将呈现淡蓝色,无模板和无引物阴性对照将呈现无色或非常浅的蓝色,样品管的颜色如果接近阳性对照则说明有扩增,如果接近阴性对照则说明无扩增。标准的反应结果如下图(左边为阴性,右边为阳性):
7. 如果结果不明确,则需要电泳确认:取扩增产物5 μL跟上样液(loadingbuffer)混合后上样,出现LAMP特征性电泳图谱则表示有扩增。由于电泳需要打开反应管的盖子,非常容易污染实验环境,所以LAMP电泳区域必须跟反应设置区域分开。
8. 结果分析:如果阳性对照能够扩增而阴性对照不能扩出,则实验有效。如果阳性对照没有扩增出条带,则试剂盒的问题,请跟厂家联系。如果阴性对照出现扩增条带,则说明LAMP样品或试剂被上次扩增产物污染,需要注意操作的规范性,最好重新设计针对另一区域的新引物。
附录:免DNA提取操作步骤
1. 配制免 DNA 提取溶液 A 工作液 1mL(足够 10 个样品,如果待测样品数量为其他数字,各成份用量需要相应调整):在一干净塑料管中加入 10μL 溶液 A 成分一,20μL 溶液 A 成分二和 970μL 超纯水,充分混合均匀即得 1mL溶液 A 工作液。处理一个样品需要 100μL 溶液 A 工作液。没用完的溶液 A工作液可室温放置,但最好在一周内用完,不要长期放置。
2. 对检测基因组 DNA,按参考下取样到一干净的塑料离心管中(对表中未列出的植物,用户需要自己摸索最佳用量):
样品种类 取用量
动物组织 1-5 mg
鼠尾 2mm 长
血液样品 不超过 20 μL
植物叶片 1-5 mg,多酚多醌植物不要超过 0.5mg
植物种子(去皮) 1-5 mg
细菌或酵母培养物 0.2-0.5mL 培养物的沉淀
3. 加入 100 μL 溶液 A 工作液,确保样品被溶液淹埋。95℃保温 10 分钟。
4. 待冷却到常温后加入 10μL 溶液 B 并混匀得细胞裂解液,放冰上待用。每次 LAMP 扩增取 1-2μL 细胞裂解液当模板即可。如果细胞裂解液暂时不用,可以放-20℃长期保存。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!