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克必隆B载体
人线粒体基因组的特点: 1、人线粒体基因组为16,569bp的双链闭环分子,一条链为重链(H链),一条链为轻链(L链),两条链均有编码功能,每个 mtDNA分于编码13种蛋白质和24种结构RNA(22rRNA,2tRNA). 2、线粒体DNA为母系遗传. 3、结构基因不含内含子,部分区域有基因重叠,因此病理性mtDNA突变更易发生. 4、mtDNA突变频率更高. 5、线粒体DNA突变的表型表达与核DNA不同。 第四节 细菌和病毒基因组
一、细菌基因组的特点。 1.功能相关的几个结构基因往往***在—起,受它们上游的共同调控区控制,形成操纵子结构, 2.结构基因中没有内含子,也无重叠现象。 3.细菌DNA大部分为编码序列。
二、病毒基因组的特点 1.每种病毒只有一种核酸,或者DNA,或者RNA; 2.病毒核酸大小差别很大,3X103一3X106bp; 3.除逆病毒外,所有病毒基因都是单拷贝的。 4.大部份病毒核酸是由一条双链或单链分子(RNA或DNA),仅少数RNA病毒由几个核酸片段组成. 5.真核病毒基因有内含子,而噬菌体(感染细菌的病毒)基因中无内含子. 6.有重叠基因.克必隆B载体
转录后加工在细胞核内对基因产物(mRNA前体)进行各种修饰、剪接和编辑,使编码蛋白质的外显子部分连接成为一个连续的开放读 框(open reading frame,ORF)的过程称为转录后加工.一、mRNA前体加工的分子机制 - 核内mRNA前体—异质性核RNA(heterogeneous nuclear RNA,hnRNA), hnRNA与蛋白质结合形成核异质性核糖核蛋白(hnRNP), mRNA前体的加工在hnRNP上进行. (一)5’-端加帽(capping) —mRNA前体的5’-端加甲基化鸟苷(m7pppN) 5’端m7G帽子结构的作用: 1.使mRNA更稳定 2.增加蛋白质合成的效率 3.帽子结构对mRNA前体的剪接是必需的(二)3’-端接多聚腺苷(poly(A)) —在mRNA前体3’端接上一个约200—250个腺嘌呤核苷酸(A)的尾巴。 poly(A)尾巴的作用: 1.有利于mRNA通过核孔; 2.参与稳定mRNA;克必隆B载体 3.增强翻译效率。(三)mRNA前体的剪接剪接(sp!icing)—剪除内含子,并将外显子连接 1.真核内含子的序列特征:真核内含子总是由Gu开始,以AG结束,内含子的5’-端剪接点(供位)和3’-端剪接点(受位), 以及内含子中的一个内部序列分支点(branch site)是mRNA前体正确剪接所必需的。 2.mRNA前体的剪接机制 -剪接过程由二步连续的转酯反应组成.该过程中产生一个套索状中间体( lariat intermediate),结果使2个原先被分隔的外显子连接。 3.剪接体(spliceosome) 细胞核内的小分子RNA(一般≤300碱基)—SnRNA(small nuclear RNA),包括U1—U6等。 snRNA与特异的蛋白质形成复合物-SnRNP.mRNA前体与snRNP形成的复合物—剪接体.mRNA前体的剪接通过剪接 体进行。
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