产品详情
大肠杆菌DH10Bac化学感受态细胞
E.coli DH10 Bac Chemical Competent Cell
产品及特点本产品是采用特殊工艺处理得到的大肠杆菌 DH10 Bac 感受态细胞,适用于昆虫杆状 病毒 Bac-to-Bac 系统中同源重组的菌株,用于产生重组 Bacmid。使用 pUC19 质粒检测, 本产品转化效率可达 107CFU/μg。
DH10Bac 细胞包含亲本 Bacmid bMON14272 和辅助质粒 pMON7124。亲本 Bacmid 包含一个 mini-F 复制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位点和 lac Zα-互补因子。 辅助质粒包含 tns ABCD 区域,该区域提供了 mini-Tn7 从供体质粒插入亲本 Bacmid 靶 位点所需要的转座蛋白。供体如 pFastBac 系列质粒(pFastBac1,pFastBacDual 等) 含有 Tn7R 和 Tn7L 同源重组臂,Tn7R 和 Tn7L 之间包含庆大霉素抗性基因、昆虫病毒 多角体基因启动子、多克隆位点和 SV40 病毒的 PolyA 加尾信号。当含有靶基因 pFastBac 的重组质粒转化到 DH10Bac 细胞后,发生重组后就可产生重组 Bacmid,提取纯化重组 Bacmid 转染昆虫细胞 Sf9 或 Sf21 就可以包装产生昆虫病毒。此外,DH10Bac 细胞中的 The φ80dlacZDM15 基因的产物可以实现β-半乳糖苷酶的α-互补现象,用于重组 bacmid 的蓝白斑筛选。
菌株基因型为:F - mcrA Δ(mrr -hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λrpsL nupG/pMON14272/pMON7124
运输及保存 干冰运输、-80℃保存,避免反复冻融,有效期半年。
自备试剂 重组质粒、SOC 或 LB 培养基等
使用方法 1. 制备含 有如 下抗生 素的 LB 固 体平板 :50 μ g/mL Kanamycin ,7 μ g/mL
gentamicin,10 μg/mL tetracycline,100 μg/mL X-gal,40 μg/mL IPTG。
2. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100 μL,可以根据实际情况分装使用。
以下实验以 100 μL 感受态细胞为例。
3. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入 1-10 ng 重组质粒,用移液器轻轻吹打混匀,冰浴 30 分钟。
4. 42℃热击 90 秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置 2-3 分钟。
5. 每个离心管中加入 900 μL 无菌的 SOC(不含抗生素),混匀后置于 37℃ 摇床,200rpm 振荡培养 4 小时。
6. 用 SOC 培养基进行 10 倍梯度稀释,如分成 3 个稀释梯度 10-1,10-2,10-3。
7. 取 100 μL 的各个梯度的培养物用于涂布。等平板中的液体完全吸收后,倒置平板,37℃培养 24-48 小时。
8. 保留剩余的菌液保存于 4℃,视平板上菌落生长情况决定去留。
注意:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于 37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于 4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!