产品详情
糖蛋白染色试剂盒(PAGE胶专用)
Staining Kit for Glycoprotein
本产品为在SDS-PAGE凝胶或蛋白免疫印记硝酸纤维素膜上检测糖蛋白的试剂盒。该方法使用三种试剂,所需时间仅需不到两小时,而其他的染色方法需要四到五小时。染色后的糖蛋白为品红色条带,背景为浅粉色或者无色。
产品特点:
1.包括一种阳性对照蛋白及一种阴性对照蛋白。
2.简洁、易储存的试剂盒。
3.本产品足够10张mini-PAGE胶或20张8×8cm蛋白免疫印记硝酸纤维素膜染色。
产品组成:
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
自备试剂:0.9%NaCl溶液或PBS缓冲液、BCA工作液。
使用方法:
实验前准备
1.配制3%乙酸溶液:将30mL冰醋酸与970mL超纯水混匀,室温保存备用。
2.配制50%甲醇溶液:将250mL甲醇与250mL超纯水混匀,室温保存备用。
3.配制氧化试剂:向氧化试剂干粉中加入250mL的3%乙酸溶液,充分混匀溶解后得到氧化试剂溶液,室温保存备用。
4.配制还原试剂:向还原试剂干粉中加入250mL的超纯水,充分混匀溶解后得到还原试剂溶液,室温保存备用。
5.配制阳性对照(辣根过氧化物酶):向1mg固体中加入0.5mL超纯水,使得溶液浓度为2mg/mL。用SDS-PAGE上样缓冲液将溶液稀释到终浓度为1mg/mL。对于80mm×80mm的凝胶来说,每个泳道加5到10μl的阳性对照。将配制好的阳性对照分装后-20℃保存。
6.配制阴性对照(大豆胰蛋白酶抑制剂):向1mg固体中加入0.5mL超纯水,使得溶液浓度为2mg/mL。用SDS-PAGE上样缓冲液将溶液稀释到终浓度为1mg/mL。对于80 mm×80 mm的凝胶来说,每个泳道加5到10μl的阴性对照。将配制好的阴性对照分装后-20℃保存。
7.样品稀释:用SDS-PAGE上样缓冲液将样品浓度稀释为1mg/mL,对于80mm×80mm的凝胶来说,每个泳道加5到10μl的样品。
凝胶染色的操作步骤(注意:请在通风橱中进行以下操作)
1.取出电泳后的SDS-PAGE凝胶,加入到100mL 50%甲醇溶液中,完全浸泡30分钟后,倒出甲醇溶液。
2.用100mL 3%乙酸溶液洗涤胶块两次,每次轻轻振荡10分钟。
?注:如有需要,此步的胶块可在超纯水中4℃过夜处理。
3.将胶块转移到25mL氧化试剂中,轻轻振荡15分钟。
4.用100mL 3%乙酸溶液洗涤胶块3次,每次轻轻振荡5分钟。
5.将胶块转移到25mL糖蛋白染色试剂中,轻轻振荡15分钟。
?注:若染色试剂中有晶体析出,只需离心取上清液去除晶体即可,不要加热来溶解晶体。
6.将胶块转移到25mL还原试剂中,轻轻振荡5分钟。
7.用3%乙酸溶液洗涤胶块,然后用超纯水洗涤至显色,糖蛋白将显现为品红条带。胶块保存在3%乙酸溶液中。
硝化纤维素膜染色的操作步骤(注意:请在通风橱中进行以下操作)
1.用20mL 3%乙酸溶液洗涤膜两次,每次轻轻振荡10分钟。
2.将膜转移到10mL的氧化试剂中,轻轻振荡15分钟。
3.用10mL 3%乙酸溶液洗涤膜3次,每次轻轻振荡5分钟。
4.将膜转移到10mL的糖蛋白染色试剂中,轻轻振荡15分钟。(注:若染色试剂中有晶体析出,只需离心取上清液去除晶体即可,不要加热来溶解晶体。)
5.将膜转移到10mL还原试剂中,轻轻振荡5分钟。
6.用3%乙酸溶液洗涤膜,然后用超纯水洗涤至显色,糖蛋白将显现为品红条带。膜可保存在3%乙酸溶液中。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!