产品详情
CTX大鼠脑星形胶质细胞的特性及培养步骤!
基本信息
平台编号:bio-105979
规格:1ml/T25
拉丁属名:CTX(大鼠脑星形胶质细胞)
种属:大鼠细胞系/脑、神经系统
到货周期:10-15个工作日
细胞用途:仅供科研使用。
细胞特性
1)来源:脑
2)含量:>1x10e6 个/mL
3)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
4)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存:可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式:(1)干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备DMEM培养基(DMEM,GIBCO,货号11965-092);北美胎牛血清(United States,GIBCO,货号16000-044),10%;双抗1%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养,补加培养基至6ml。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:
1.弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加2ml完全培养基终止消化。
3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,加1-2mL培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按1:2到1:5比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。
下面T25瓶为例:
1.细胞冻存时,弃去培养基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,细胞变圆脱落后,加入2ml完全培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2.1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮,加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀,按每1ml的数量分配到冻存管中,注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。
3.将冻存管置于程序降温盒中,放入-80度冰箱,至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
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