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本产品是水饱和酚-氯仿异戊醇的25:24:1的混合液,pH中性,用于RNA
提取时去除蛋白质、多糖、脂类和酚类等杂质。本产品不能用于DNA提取。
苯酚使蛋白质变性,同时抑制了RNase的降解作用。氯仿抽提加速有机相
与液相分层,去除核酸溶液中的迹量酚。异戊醇减少蛋白质变性操作过程中产生
的气泡。使用酚:氯仿:异戊醇抽提离心后的上层为含RNA的水相、中间为变
性蛋白与DNA,下层为有机溶剂相。.
由于苯酚与水有一-定比例的互溶,所以如果使用非饱和酚,样品中的水分会
进入酚相,样品会丢失。同时水相中也会有少量的酚,这些残留的酚会抑制后续
酶反应。而饱和酚就没有丢失样品的缺点,因为它已经提前充分吸足了水分(饱
和酚中含10%左右的水分) ,因此不会丢失样品。但由于仍然会有少数酚进入水
相,抑制后续反应。
氯仿的作用:是让水和酚彻底分开,不互溶,彻底去除水相中的残留苯酚。
异戊醇的作用是降低表面张力,从而减少操作过程(常常有震荡步骤)中气
泡的产生,而这些气泡的表面张力可能会使DNA断裂。另外,异戊醇还有助于
水相和酚相分相,使离心后的上层水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维
持稳定,便于移取上清。