产品详情
本产品主要用于快速提取新鲜或冷冻的动物组织中的基因组DNA。
它具有下列特点:
1. DNA 更加纯净,大多数DNA样品的0D260/280值在1.8-1.9之间。
2. DNA产率- -般在200ug/g左右(跟组织种类密切相关)。
3.可直接用于PCR、酶切、杂交等后续反应。
4.操作更加简单,离心吸附操作代替离心沉淀,整个过程室温操作约10分钟,
适合大规模样品处理。
5.安全无毒,本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。
6.性价比高,质量和国外同类产品相当,但价格更便宜。
注意:溶液A容易产生沉淀,溶液B十分粘稠,用前均需要在65C水浴中加热使
沉淀溶解或粘稠度降低,用前充分摇匀。
1.根据使 用材料的不同进行下列操作:
a)对贴璧细胞: 吸尽培养液,在每10平方厘米细胞中加入0.8 mL预热的溶液
A,用枪充分吹打以确保细胞全部裂解,然后把裂解液转移到1.5mL塑料离
心管中。
b)对悬浮细胞:离心收集细胞,吸尽液体,在每1-5X106悬浮细胞中加入0.8mL
预热的溶液A,用枪充分吹打以确保细胞全部裂解。然后把裂解液转移到1.5
mL塑料离心管中。如果是fibroblasts或carcinoma细胞,0.8 mL溶液A
的细胞使用量不要超过1X106个细胞。
c)对新鲜或冷冻的组织:先将剪切成小块的新鲜组织或冷冻保存的组织放入10
mL或15mL塑料离心管中,每50-100mg组织加0.8mL预热的溶液A,
用剪切式匀浆器匀浆30秒左右,然后把裂解液转移到1.5 ml塑料离心管中。
对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA),.
建议组织的使用量不要超过50mg.
d对DNALOCKER保存组织:先用纸吸去DNALOCKER液体后再剪切成小块,其余
操作同新鲜成冷冻组织的处理。
2. 加入0.4 mL預热的溶液B到裂解液中。由于溶液B十分粘桐,可将1mL枪
头剪掉- - 截再用,也可以用称量方法加0.4 go加入溶液B后需要颠倒数次充
分混匀。
3. 65C水浴5-10分钟。如果室温放置,DNA产量将降低10-20%。
4.加入 0.2mL自备氯仿,振荡器上充分振荡混均30秒,此时溶液将呈乳白色。
一定要确保离心管底的液体被震荡起来。
5.
12000-15000 g室温离心2分钟。上清透明,中间层为白膜(蛋白层)。
6. 小心将上清液平均转移到两个新的离心管中,避免触及中间的白膜。
7.每个管中 加入1.5倍体积的溶液C,充分颠倒混匀。
8. 分两次上柱(即先转移- -半的混合液到离心吸附柱中,室温放置2分钟,
12000-15000 g室温离心半分钟,弃穿透液,然后再将剩下的混合液到离心
吸附柱中,室温放置2分钟,12000-15000 g室温离心半分钟,弃穿透液)。
9. 加0.7 mL通用洗柱液到离心吸附柱中,12000-15000 g室温离心半分钟,
弃穿透液。.
10.加0.3 ml通用洗柱液到离心吸附柱中,12000-15000 g室温离心半分钟,
弃穿透液。.
11. 12000-15000 g室温再离心半分钟。此步十分重要,否则残留的通用洗柱液
会污染DNA。
12.室温放置半分钟使残留乙醇挥发。
13.将离心吸附柱转移到- 新的1.5 mL塑料离心管中,加入50-100 uLDNA洗
脱液2.0,室温放置离心吸附柱1-2分钟。
14.12000-15000 g室温离心半分钟,离心管中溶液即为DNA样品,可以立即
使用或存放于冰箱待用。