产品详情
本产品是专门用于从昆虫、节肢动物、蛔虫、扁形虫和一些富含多糖的动物组
织中提取基因组DNA的试剂盒。其原理是基于去垢剂在适当的离子强度条件下,特
异地跟基因组DNA结合形成沉淀,然后在用硅胶膜离心吸附法进行进--步纯化得到
DNA。
本产品具有下列特点:
1.适 用于用常规方法难以提取的、各种富含多糖的动物,包括昆虫、节肢动物、
蛔虫、扁形虫等。
2.除新鲜样品外,还适合于各种保存状态的样品,包括冷冻的样品、用乙醇保存
的样品和福尔马林保存的样品。
3.提取到的基因组 DNA完整性,长度一般在20-50 Kb。
4. DNA 纯净,0D260/280- 般都在1.8左右,可直接用于PCR、酶切、杂交
等。
5. 操作简单,整个过程约30分钟。
6.安全无毒, 本试剂盒对人体无毒,无腐蚀性和刺激性气味。
1. 称取0.1-0.3 g昆虫样品转移到塑料研钵中,液氮研磨成粉后转移到-一个干净
的1.5 mL塑料离心管中。
注意:最好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵,因为DNA会吸附在表面,影响得
率。
2. 在离心管中加入1 mL 65C预热的溶液A并用移液枪头充分吹打混匀(如果溶
液A有沉淀,需先在65C加热溶解后摇匀再使用)。
3. 65C保温5-30分钟,其间最好吹打混匀2-3次。
4.12000-15000g 室温离心3分钟。
5.将不超过0.75 mL的上清转移到新离心管中。有时候上清液中还会有少量细小
悬浮物,但对后续操作没有影响,不必进行特殊处理。
6.在上清液中加入等体积的溶液B,上下颇倒30秒充分混匀,溶液将呈白色混浊
状.
7.将其置于冰浴中放置5-10分钟。
8.12000-15000g 室温离心3分钟,转移上清到新的1.5 mL塑料离心管中。
9.加入02mL的氯仿自备),震靄器上充分振靄30秒混匀。
10.12000-15000 g室温离心3分钟,两相交界面将有白色膜状物,小心转移上清
到新1.5-5mL塑料离心管中。注意:由于下一步要加1.5 倍体积的溶液c,所
以新的离心管的体积要足够大。
11.加入1.5倍体积的溶液C,上下颠倒30秒混匀,然后分多次的将混合液转移到
离心吸附柱中。
12.每次转移0.7-0.8 mL混合液后,室温放置5-10分钟。.
13.12000-15000g室温1分钟,弃穿透液。.
14.对需要多次上柱的样品,可以在此将剩余的样品加到离心吸附柱式中,重复第
12-14步的操作。
15.将0.7 mL通用洗柱液加入离心柱,室温离心1分钟,弃穿适液。
16.在离心吸附柱中加入0.3 mL的通用洗柱液,12000-15000 g离心半分钟(此
步为第二次洗涤)。
17.空甩1分钟去除残留液体。
18.将离心柱放置在一-新的 1.5 mL塑料离心管中,加入30- 100 uL DNA洗脱液
2.0.
19.室温放置5分钟后离心1分钟,管底即为昆虫DNA溶液,可立即使用,也可
长期保存在- 20C.
20.可以重复上步一次,以洗脱更多的DNA.