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基于PCR的中药分子鉴定方法是辨别中药真伪,保证药材质量,促进中药产
业现代化的十分重要的手段。但于日晒,高温烘烤等处理极大地破坏了中药材
DNA的完整性;处理过程中多酚多糖及其氧化物也会与DNA发生复杂的化学反应,
所以从中药材中提取可以用于PCR的DNA比从新鲜植物中提取要困难很多。为解
决这一问题,天泽基因在植物DNAour产品基础上开发了本产品。其特点如下:
1.适合于大多数药材。
2.得到的 DNA纯净,OD260/280一般都在1.6以上,原液或100倍之内的稀
释液一般都能直接作为PCR模板。
3. 操作简单,整个过程只需要三十分钟左右。
4. 试剂无毒无害,环保卫生。
1.65C預热溶液 A待其沉淀溶化后,充分混匀,取0.75 mL加入到10- 15mL
的塑料离心管中井放置于65C特用。
2称取20mg左右的中草药,先剪成或研靡成微小的碎片,然后转移到预热的
溶液A中匀骤,匀骤过程中将产生大量泡沫,属于正常现象。也可以液氨研磨
后将中草药粉术加入到预热的溶液A中建议不要在陶器成玻璃研体中研麝,
因为其主要成分二氧化硅会非特异地吸附DNA,降低DNA回收量。但可以在
塑料研体中研磨)。
3将匀骤液置于65C水浴保温5分钟,然后全部转移到新的1.5mL塑料离心管
中此时匀浆液较为粘树,可将枪头剪去- 截后转移上清,植物碎片可倒入。
4. 12000-15000 g室温离心3分钟,将上清转移到新的1.5mL塑料离c管中上
清液的体积一般为200-700 uL,如果体积超过700 uL,多余部分可以不要)。
有的上清液中会有少量细小块状物,但对后续操作没有影响,不必进行特殊处
理。
5在 上清液中加入等体积的溶液B,上下颠倒30秒充分混匀(溶液将呈白色混
浊状),然后置冰洛中5分钟。
6 1000-15000g室温离心3分钟,转移上清到新离心管中。
7. 加入02 mL的氯例自图,震荡器上充分药30秒混匀。
& 12000-15000 g室温离心3分钟,两相交界面将有白色膜状物。小心转移上
清到新高心管中。
9重复氧仿抽提步靠-次,此步可以有效去脉含色素物质。
10.加入0.6-1 倍体积的异丙酶(自备,上下颠倒30秒混匀。
11.12000-150000 g离心5分钟,弃上清,管底将有微小DNA凯淀。
12.沉淀用75%乙醇清洗2次后,室温晾干。.
13.加入50-100 μ自备暖冲液[如TE屠解沉淀。DNA可用于电泳,酶切和
PCR等反应。如果需要测OD,则必领乙酶沉淀去除降解的RNA.