产品详情
T7 耐热RNA聚合酶2.0(高浓度)
产品编号 | 产品名称 | 规格 | 价格(元) | 说明书 |
ZY-6601A | T7 RNA Polymerase | 5KU | 500 | ![]() |
ZY-6601B | 25KU | 2,000 | ||
ZY-6603A | T7 耐热RNA Polymerase 2.0 | 5KU | 650 | ![]() |
ZY-6603B | 25KU | 2,800 | ||
ZY-6604 | T7 耐热RNA Polymerase 2.0(高浓度) | 50KU | 5,600 | ![]() |
ZY-6604A | T7 耐热高产RNA 合成试剂盒 | 10T | 600 | ![]() |
提供两种T7 RNA 聚合酶:野生型(A3601)和耐热型(A3603/A3604)。野生型T7 RNA 聚合酶可在37℃对模板进行高效体外转录,与野生型噬菌体 T7 RNA 聚合酶相比,T7耐热RNA聚合酶可在更高的温度下进行体外转录。它可在37-52℃条件下进行高效的体外转录,最佳温度为37℃,50℃反应条件下仍然保留50%以上的活性,而野生型在此温度下无活性。基于此耐热的体外转录反应特性具有以下优势:(1)提升了GC含量较高RNA的转录效率;(2)提升了长片段RNA的合成能力;(3)在使用帽类似物时,提高了共转录的加帽效率;(4)减少了 dsRNA 副产物的形成,降低了合成 RNA 的免疫原性; (5)提升NASBA和CRISPR核酸扩增检测性能。该系列酶均来自重组 E.coli BL21菌株纯化而得,无核酸酶污染。 T7耐热高产RNA合成试剂盒是基于T7 耐热RNA聚合酶而组建的试剂盒,产量超过 MegaScript T7 Transcription kit,可在体外高效合成多种类型的 RNA,如mRNA、lncRNA、shRNA等。利用T7 RNA 聚合酶2.0识别T7 promoter(TAATACGACTCA CTATA G G)以倒数第二个G碱基为起点开始转录,该试剂盒可以将少量样本进行高效转录,单次反应可获得高达150 μg 的产物,转录长度可达5000nt以上。利用该试剂盒得到的 RNA 适用于多种下游应用,如RNA结构和功能研究、核酸酶生物化学研究、RNase保护分析探针、印迹杂交、反义 RNA 及 RNAi 实验、微阵列分析、显微注射、体外翻译和 RNA 疫苗等。 | ||
应用 | ||
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1X T7 Transcription Buffer | ||
40 mM Tris (pH 7.8), 20 mM NaCl, 18mM MgCl2,2 mM Spermidine HCl, 10 mM DTT 。 | ||
酶储存液 | ||
10 mM Tris-HCl, 0.1 M NaCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 50% Glycerol, 0.01% (w/v) Triton X-100 , pH 7.5。 | ||
储存 | ||
-20°C可保存2年,避免反复冻融。 | ||
热失活 | ||
75°C,10min。 | ||
注意事项 | ||
1. 转录DNA模板的种类:推荐使用含T7启动子的线性化质粒和PCR产物作为模板。 2. 转录模板的纯度会显著影响体外转录反应。在质粒DNA抽提过程中残留的RnaseA会显著影响转录RNA的质量。通过酚-氯仿抽提的质粒DNA为最佳模板。 3. 该酶对高浓度NaCl或KCl不耐受,当其浓度高于 150mM时,其活性受到显著抑制(~50%)。 4. 在20μl反应体系中加入0.02U热稳定无机焦磷酸酶可显著提高转录产量(提高25~50%)。 | ||
实例 | ||
1.野生型和耐热型T7 RNA聚合酶的耐热性能比较 以20ng DNA作为模板,分别在反应体系(20 μl)中加入100U的T7 RNA聚合酶和T7 耐热RNA聚合酶2.0进行体外转录,结果可见T7 耐热RNA聚合酶2.0在50°C仍具有较高活性,而野生型T7 RNA聚合酶在该温度下没有活性。 | ||
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2.热稳定无机焦磷酸酶对转录产量的影响 在反应体系(20 μl)中加入0.02U的热稳定无机焦磷酸酶(货号C5007)可显著提高转录产物的产量。 | ||
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3.以不同大小的线性化质粒作为模板,应用T7耐热RNA聚合酶2.0进行转录性能测试 由结果可见:T7耐热RNA聚合酶2.0在50°C条件下仍具有理想的转录活性。 | ||
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4.以不同大小的PCR产物作为模板,应用T7耐热RNA聚合酶2.0进行转录性能测试 由结果可见:T7耐热RNA聚合酶2.0可有效转录>5000nt的RNA分子。 | ||
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特别提示:本公司的所有产品仅用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!