产品详情
南极热敏UDG
产品编号 | 产品名称 | 规格 | 价格(元) | 说明书 |
ZY-6029A | 南极热敏UDG | 100U | 600 | |
ZY-6029B | 500U | 2,500 |
热敏型尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)是来源于嗜冷海洋细菌经大肠杆菌表达纯化的的重组蛋白,又称南极热敏UDG。该热敏UDG酶能有效地水解单链或双链 DNA 上的尿嘧啶,产生的缺嘧啶位点,在高温或高 pH 下,极易水解断裂。该酶对RNA无活性,主要用于PCR扩增产物的防污染。大肠杆菌来源的尿嘧啶-DNA 糖基化酶较为耐热,经95℃10min处理仍会残留有少量的尿嘧啶-DNA 糖基化酶活性,导致含有dU碱基的PCR产物的降解。而来源于嗜冷海洋细菌的热敏UDG在50℃ 5min即完全失活,在进行PCR扩增前,在PCR混合液中添加尿嘧啶-DNA 糖基化酶(热敏性),25℃10min即可消除PCR产物的残留污染,由于尿嘧啶-DNA 糖基化酶(热敏性)在PCR循环的94℃变性一步便可被灭活,因此不会影响新的含dU的PCR产物。 | ||
组分 | ||
组分名称数量Heatlabile Uracil DNA Glycosylase(1 U/μl)100 μl/500 μl | ||
应用 | ||
| ||
活性定义 | ||
在标准反应体系下,37°C每分钟催化 60 pmol 尿嘧啶从含尿嘧啶的双链 DNA 上释放所需要的酶量为一个活性单位。 | ||
反应buffer | ||
Heatlabile Uracil DNA Glycosylase (UDG)与绝大多数的PCR 聚合酶反应缓冲液都是兼容的,但在高离子浓度(>100mM)下活性会受到抑制。 | ||
酶保存液 | ||
20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, , 50% Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。 | ||
储存 | ||
-20℃可保存2年,避免反复冻融。 | ||
热失活 | ||
50℃,10min。 | ||
实例 | ||
为评估热敏UDG对残留模板去除的能力,我们首先使用含dUTP的RAPA3G Probe qPCR MasterMix扩增三种基因产物(GAPDH,EHP,Covid-19 N Gene),然后以105拷贝的含U产物作为模板,分别加入0.1U/reaction、0.25U/reaction、0.5U/reaction和1U/reaction 的热敏UDG(C5029)进行qPCR,程序如下: 25℃ 2min, 95℃ 5min 95℃ 5s 60℃ 30s 45cycles 25℃孵育2min使UDG发挥活性,降解含U产物,以降低其产生假阳性信号的机会;统计三组加热敏UDG和不加UDG组反应的Ct值(如下表),得到△Ct,△Ct值越大说明去除残留产物的效率越高。本实验说明:0.1U/反应的该热敏UDG即可很好的降解含U产物(如下图),即具有良好的去除残留模板的能力。 | ||
热敏 UDG(C5029)GAPDH Ave.CtEHP Ave.CtCovid-19 N Gene Ave.Ct019.519.621.30.1 U/reaction34.836.837.90.25U/reaction37.339.938.20.5 U/reaction3536.938.91 U/reaction36.639.539.3 | ||
![]() |
特别提示:本公司的所有产品仅用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!