EZ Trans细胞转染试剂（低毒）

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产品描述

EZ Trans细胞转染试剂（低毒），作为新一代的转染试剂，其转染原理是带正电的阳离子聚合物与核酸中带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过胞吞作用进入细胞。

该产品经过的优化处理，具有转染效率高，细胞毒性低，操作简单，重复性好，适用范围广等特点。

保存方法

冰袋运输，4℃保存，保质期12个月。不可冷冻！

使用方法（以 24 孔板为例，其他培养皿中转染请参考表1）

1. 接种细胞

对于贴壁细胞，转染前18-24 h进行铺板（不含抗生素），使其在转染时的密度大约在80%左右。对于悬浮细胞，转染当天，配制EZ Trans-DNA复合物之前进行铺板，每500 μL生长培养基中加入4~8×105cells。  

【注】：培养液中的血清不影响转染效率。转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。

2. 准备EZ Trans-DNA复合物

（1）对于每孔细胞，将1 μg质粒DNA稀释到40 μL无血清的高糖DMEM培养基（或者OPTI-MEM Ⅰ 培养基），混匀。

（2）对于每孔细胞，将3 μL EZ Trans转染试剂稀释到40 μL无血清的高糖DMEM培养基（或者OPTI-MEM Ⅰ 培养基），轻轻混匀。

【注】：无血清的高糖DMEM培养基是稀释液，不能使用含血清的培养基进行DNA和EZ Trans转染试剂的稀释。因为EZ Trans-DNA转染复合物的形成过程不能含有血清。

（3）将稀释好的EZ Trans转染试剂尽快全部加入到已稀释好的质粒DNA中，轻轻混匀。

【注】：此混合的顺序不能反向进行。

（4）室温放置10-15 min，以形成EZ Trans-DNA复合物。

3. 转染细胞

（1）将上述80 μL EZ Trans-DNA转染复合物均匀滴入到含细胞的培养皿中。轻轻晃动培养皿或轻微振荡，让EZ Trans-DNA复合物分散均匀。

（2）在37℃，5% CO2培养箱培养6-18 h，去除含EZ Trans-DNA复合物的培养液，更换新的培养液，继续培养至对转入基因表达分析。

【注】：筛选稳定转染细胞株，转染细胞24 h后，将细胞传代至新鲜的生长培养基中（将细胞稀释10倍以上），在37℃，5% CO2培养箱中孵育24 h，加入筛选培养基。在有转染抗性基因相匹配的药物筛选条件下，约 1～2周可筛选到耐药性克隆，在这期间需经常更换含筛选药物的生长培养基。

注意事项

1. 质粒质量：请务必使用高纯度无内毒素转染级质粒。通过260 nm光吸收测定DNA 浓度，260 nm / 280 nm比值确定 DNA 纯度（比值应该在1.8～2.0的范围之内）。如有可能，请通过琼脂糖凝胶电泳检测质粒的完整性。

2. 细胞条件：使用适当保存和经常传代的健康细胞。确保细胞没有被细菌、真菌或支原体污染。如果细胞是近期复苏的液氮冻存细胞，请在转染前至少传代两次。建议使用GIBCO或者生物的胎牛血清培养细胞。

3. 细胞培养液要求： EZ Trans细胞转染试剂可用于有血清培养基的转染，并且转染前不需要换培养基。但是，制备转染复合物时要求用无血清培养基稀释DNA和转染试剂，因为血清会影响复合物的形成。确保细胞培养液没有被细菌、真菌或支原体污染。转染时培养液中不添加抗生素。

4. DNA浓度和EZ Trans细胞转染试剂量的优化：DNA浓度和转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，初次使用应优化DNA浓度和转染试剂量以得到最大的转染效率。使用者可尝试每 1 μg DNA使用 1～4 μL体积EZ Trans细胞转染试剂进行优化。DNA和转染试剂的比例，通常推荐是1:2~1:5。

表1：不同培养体积对应的待转DNA、EZ Trans、稀释液用量

【注】：该表使用量仅供参考，具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件进行优化。使用时DNA（μg）: EZ Trans细胞转染试剂（μL）比值保持在1:2~1:5。

特别提示：本公司的所有产品仅用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！