产品详情
EZ ECL pico化学发光液(超敏型)
订购信息
产品名称 | 货号 | 规格 | 价格 |
EZ ECL pico化学发光液(超敏型) | ZY-64L024 | 100 mL | 500 |
EZ ECL pico化学发光液(超敏型) | ZY-64L025 | 500 mL | 2000 |
产品描述
EZ ECL Pico化学发光液是一款增强型化学发光(ECL)HRP底物,为使用辣根过氧化物酶(HRP)偶联物的免疫印迹实验提供了明亮的信号、低至皮克级检测灵敏度。该ECL底物能够兼容各种膜、封闭液和宽范围抗体稀释液,以出色性能、通用性和高性价比,满足用户的免疫印迹应用需求。可帮助用户在免疫印迹分析过程中实现皮克级的蛋白检测(<1×10-9g),极其节省抗体。本产品一抗浓度范围0.2~1 μg/mL(以1 mg/mL储存液稀释1:1,000至1:5,000倍);二抗浓度10-50ng/ml(以1 mg/mL储存液稀释1:20,000至1:100,000倍)。
EZ Pico底物的特点:
• 灵敏度高 :检测硝化纤维素膜或PVDF膜上皮克级的蛋白条带。
• 信号持续时间长:在条件优化情况下,经底物孵育的印迹条带能够持续输出6~8 h的可检测光信号。
• 试剂稳定:工作液在24 h内保持稳定,试剂盒在室温下可稳定放置长达1年。
产品组分
组分名称 | 产品货号规格及组分 | |
AP34L024(100 mL) | AP34L025(500 mL) | |
A液 | 50 mL | 250 mL |
B液 | 50 mL | 250 mL |
运输与保存方法
常温运输,4℃避光干燥保存,保质期1年。
使用方法
1. 按常规方法执行常规电泳、转膜、HRP标记抗体或者HRP标记核酸探针孵育、洗膜。
【注】:优化抗原和抗体的浓度。必须使用建议的抗体稀释度,以保证阳性结果。将一抗浓度稀释到0.2~1 μg/mL,将二抗浓度稀释到10~50 ng/mL(最佳稀释度取决于一抗和膜上的抗原量)。
2. 新鲜配制发光工作液:根据用量将两种组份按1:1比例混合均匀,备用。
【注】:①短时间暴露于日光灯下不会损害该工作液,但为获得最佳结果,将此工作液保存在棕色瓶中,避免暴露于任何强光。②取A液和B液一定要用不同的枪头,工作液现配现用,室温放置数小时后仍可使用但灵敏度略有降低。
3. 用平头镊取出膜,搭在滤纸上沥干洗液,勿使膜完全干燥。用移液器将工作液加到膜上(推荐100 μL发光液/cm2膜),使之充分接触。室温孵育5分钟,准备立即压片曝光。
4. 用平头镊子夹起膜,膜的下缘轻轻接触吸水纸,去除膜上多余的液体,留下少量工作液,不可让膜完全干燥。
5. 在X光胶片暗盒内表面铺一张面积大于膜的保鲜膜。将印迹膜贴在保鲜膜上,将保鲜膜折起来完全包裹印迹膜,去除气泡和皱褶,可剪去边缘部多余的保鲜膜。用滤纸吸去多余的发光工作液。用胶带将覆盖印迹膜的保鲜膜固定在暗盒内,蛋白带面向上。
6. 将X光胶片置于膜的上面。建议第一次曝光60 s。之后可调整曝光时间以达到最佳结果。化学发光反应在底物孵育后的前5~30 min期间是最强烈的。这一反应可以持续几个小时,但强度会随时间下降,如底物孵育较长时间后曝光,曝光时间可能需要延长以获得较强信号。如果使用磷光存储成像设备(如Bio-Rad的分子成像仪系统)或CCD照相机可能需要较长的曝光时间。
注意:胶片与膜之间的任何相对移动,可能在胶片上造成人为的非特异信号。
7. 使用合适的显影剂和定影剂对胶片进行显影。如果信号太强,则缩短曝光时间或将印记膜进行剥离并降低抗体浓度重新检测。
检测系统有效性(如需要):在暗室中,在一个清洁试管中加入将1~2 mL底物工作液。关闭灯,添加1 μL未稀释的HRP标记二抗工作液。该溶液应当立即发出蓝色光,蓝光信号在随后的几分钟渐淡。
注意事项
(1)步骤1~5可在日光灯下操作;但发光液曝露于强光下时间过久灵敏度可能略有降低,移到暗房操作可避免。戴手套可以避免在膜上留下手印。
(2)长时间曝光或蛋白过量,将加深背景并使条带强弱变化失去线性关系。曝光不足则条带模糊。
(3)发光工作液孵育约3 min后膜上的条带发光。强条带发光在暗房中肉眼可见,低丰度蛋白条带发光较弱甚至肉眼不可见但可使X光胶片曝光。不能简单以肉眼观察判断条带发光时间。肉眼不可见的荧光实际上可持续数小时并使X光胶片感光,因而弱带可曝光1-10小时。如果曝光后条带不佳,可用洗膜缓冲液洗膜,重新孵育二抗,然后重新用ECL发光和曝光。
(4)由于超敏发光液极其灵敏,强烈推荐大多数进口抗体起始浓度为一抗1:1000~1:4000,二抗1:2000~1:5000。抗体浓度过高将造成高背景或没有条带,导致失败。
(5)某些保鲜膜包裹印迹膜时可能会淬灭荧光,应选择高质量保鲜膜。
(6)使用肉眼可见的预染色蛋白Marker和荧光-放射自显影曝光标签可精确确定胶片上条带的位置和大小。
(7)NaN3能抑制HRP活性,回收第二抗体应避免使用NaN3,如必需使用勿超过0.01%。
特别提示:本公司的所有产品仅用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!