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Nature Methods推荐PCR污染清除方法——德国PanReac AppliChem DNA-ExitusPlus (Cat.No. A7089)
聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)简称PCR,是一种选择性体外扩增核酸片段的方法,经过循环复制,扩增产量是指数上升,所以具有极高的灵敏度,被广泛应用于生物和医学的科研,临床各种研究中,是目前应用最为广泛的分子生物学方法之一。
但也正是由于PCR具有极高的灵敏度,微量的核酸污染便会导致假阳性扩增结果而导致实验结果不准确,这也是广大实验者最头痛的问题,如果形成气溶胶污染扩散,则可引起整个PCR实验室的污染,处理起来非常棘手,严重的甚至要关闭实验室。环境中的核酸是主要的污染源,常见的污染源有:
1. 模板提取时真空抽干装置
2. 超净台
3. 电泳装置
4. 紫外分析仪
5. 剪刀、镊子、刀片、移液器等器械
6. 离心机
7. 冰箱门把手,冷冻架,门把手或实验台面等
8. 气溶胶
9. 高压灭菌装置
传统的PCR污染清除方法主要有:稀酸处理法、紫外照射法、尿嘧啶糖苷酶(UNG)法、酶解变性、酒精沉淀等几种方式,但仍然存在无法彻底破坏DNA分子、试剂具有腐蚀性或者毒性、小片段核酸无法清除等不足。
德国AppliChem独家研发的DNA-ExitusPlus是一种无腐蚀、无致癌性的核酸污染清除溶液,该产品可将裸露的核酸完全降解至无法作为扩增模板的小片段,无法被扩增,且无法恢复,从而彻底消除了PCR过程中由于环境污染而导致的假阳性扩增。
DNA-ExitusPlusTM特点:
1. 产品为非酶类试剂;
2. 产品中各组分协同作用,快速、非序列特异性的降解核酸污染;
3. 所有组分可生物降解、无毒无害;
4. 不含有机溶剂或者挥发性物质,不含无机酸或者碱性物质,不会对金属形成腐蚀;
5. 使用简单,喷洒或浸泡处理15分钟即可完成清除作用;
6. 升温至50度可提高反应速度。
产品参数:
性状:无色或者浅黄色液体
保存温度:常温
运输温度:常温
有效期:12个月
订货信息Ordering Information:
产品货号: A7089,0500 (500ml)
使用方法:
1. 实验操作台表面
直接将DNA-ExitusPlusTM喷到操作台表面作用10~15分钟,无菌湿布擦拭后即可,无需用水冲洗;
2. 仪器表面
用布或纸巾蘸取适量 DNAExitusPlusTM擦拭仪器表面,充分作用后再用干净湿布擦一遍即可。一些小的部件可在DNA-ExitusPlusTM中浸泡10min左右,然后用清水冲洗、晾干;
3. 塑料及玻璃器皿
向容器中加入足量的DNA-ExitusPlusTM,摇晃以确保器皿内壁全部接触到溶液,充分作用后弃去溶液晾干,用蒸馏水冲洗干净晾干即可;
4. 移液器
遵照移液器说明拆取移液器的管嘴连件,于DNA-ExitusPlusTM中浸泡1min,然后用清水冲洗干净晾干便可安装到移液器上;
5. 解剖刀、镊子等实验器材
先用蘸有DNA-ExitusPlusTM的布擦拭一遍,然后将镊子等器材于DNA-ExitusPlusTM中浸泡10min以上,也可通过加热到50~60℃缩短处理时间;
6. 手臂、手套等
直接将Derma-ExitusPlus(A8740对准手臂或手套进行喷雾至全部湿润,作用3~4min即可)。
此产品与方法已得到全球知名杂志与科研工作者的认可:
(1) Esser, K.-H. et al. (2006) DNA decontamination: DNA-ExitusPlus in comparison with conventional reagents. Nature Methods 3, 151
(2) Arena, A. (2010) DNA exitus plus™ versus standard bleach solution for the removal of dna contaminants on work surfaces and tools. Investigative sciences journal 2, 20-29