MBG4试剂含有单一底物，即4,6- o-苄基-2-氯-4-硝基苯基-β-(31-β- d -纤维三糖苷)(BCNPBG4)。苄基缩醛基团可防止任何外作用水解酶如β-葡萄糖苷酶或纤维生物水解酶的水解作用。

混合连接β-葡聚糖酶(endo1,3:1,4 -β-葡聚糖酶)/地衣酶(EC 3.2.1.73)特异地从底物中释放2-氯-4-硝基苯酚(CNP)。CNP的释放速率与样品中β-葡聚糖酶/地衣酶的活性直接相关。加入pH = 10.0的Tris缓冲液，反应终止，酚色显现。

注意底物不被β-葡萄糖苷酶或纤维生物水解酶水解。底物可以被某些纤维素内酶水解(如木霉)，但这并不会导致吸光度的增加。