PullG6测定普鲁兰酶采用水溶性底物，即4,6- o -苄基-4-硝基苯-63-α- d -麦芽三糖-麦芽三糖(BPNPG3G3)，结合辅助酶α-葡萄糖苷酶和β-葡萄糖苷酶。底物在1,6-α键处被pullulanase或限制-dextrin酶水解后，释放的4-硝基苯基-β-麦芽糖苷在试剂混合物中通过α-葡萄糖苷酶和β-葡萄糖苷酶的协同作用立即水解为葡萄糖和4-硝基酚。通过加入稀碱终止反应，形成酚类离子。在400 nm处读取吸光度，得到的值与普鲁兰酶活性直接相关。