产品详情
本试剂盒用于石蜡包埋组织中基因组DNA的提取。试剂盒不使用二甲苯作为石蜡溶剂,从而增加操作人员和环境的安全性;经过独特的表面修饰的磁珠,结合核酸能力更强,洗脱更容易;操作步骤简单,适合于基因组DNA的磁珠自动化提取过程。本试剂盒纯化的DNA可直接用于各种下游操作,包括PCR、文库构建、测序分析等。
操作流程(示意图):
产品特性:
保护操作人员健康,环境安全 |
高通量:快速完成石蜡包埋样本DNA提取 |
增强肿瘤和其他疾病诊断和靶向治疗准确性 |
高效去交联效果 |
自动化适用 |
磁珠法石蜡包埋样本DNA提取试剂盒在肿瘤病人FFPE样本提取核酸的应用实例、与国际金标准试剂盒比较和通过石蜡包埋样本所提取的gDNA的real-time PCR实验验证提取效果的实例见下。
医脉赛(EmerTher)磁珠法石蜡包埋样本DNA提取试剂盒在肿瘤病人FFPE样本提取核酸的应用实例。
1.样本
四名肿瘤病人FFPE样本(3片10μm厚的石蜡切片组织样本/每人)
2.试剂
Emerther磁珠法石蜡包埋样本DNA提取试剂盒
3.核酸提取方法
EmerTher磁珠法石蜡包埋样本DNA提取试剂盒,用自动核酸提取仪提取
A、 脱蜡
1. 溶解蛋白酶K:按标签所示,吸取PK溶解液至蛋白酶K干粉中配制成蛋白酶K溶液20mg/ml,颠倒混匀数次让蛋白酶K充分溶解;
2. 取一定量石蜡包埋组织(如1-5片10μm厚的石蜡切片组织样本),转移至1.5ml离心管中;
3. 加入300μl石蜡样本液,150μl ATL和20μl蛋白酶K溶液,置于56°C 恒温水浴锅孵育1hr ,期间混匀3-5次。也可消化过夜;
B、消化
4. 在组织样本中加入150μl石蜡消化液,置于85°C恒温水浴锅孵育30min;
C、 DNA提取
5. 15000g离心5min;
6. 小心吸取全部下层液体,加入375μl裂解吸附液、30μl核酸提取磁珠,置于旋转混合仪,温和混匀20min;
7. 用磁分离架吸附磁珠1min,弃上清;
8. 加入700μl洗涤液I洗涤磁珠,颠倒混匀洗涤1min,吸附磁珠,弃上清;
9. 再次加入700μl洗涤液I洗涤磁珠1min,吸附磁珠,弃上清;
10. 加入700μl洗涤液II洗涤磁珠1min,吸附磁珠,弃上清;
11. 再次加入700μl洗涤液II洗涤磁珠1min,吸附磁珠;
12. 尽量吸弃上清后静置5min,去除乙醇残留;
13. 加入100μl洗脱液,50°C混合均匀洗脱5min;
14. 磁场吸附磁珠,回收含基因组DNA的洗脱液至另一干净离心管内;
15. 用于后续检测或-20℃储存。
4.结果:提取的DNA产量高、纯度高,方便进行下一步的PCR扩增。
磁珠法石蜡包埋样本DNA提取试剂盒与目前市场上国际金标准试剂盒的比较。
磁珠法石蜡包埋样本DNA提取试剂盒所提取gDNA的real-time PCR实验,用以验证医脉赛(Emerther)磁珠法石蜡包埋样本DNA提取效果。(石蜡包埋样本编号:1603089)
实验结论
包埋样本DNA提取试剂盒从5片石蜡样本切片中大约可以提取4微克genomic DNA。用所得gDNA做GAPDH的real-time PCR获得曲线较好,
且提取所得DNA的OD值(260/280)分别为1.81,1.90,说明所得DNA质量良好。由于该DAN提取试剂盒所提取的DNA量较多,且质量良好,证明试剂盒效果良好。