产品详情
L21(DE3)感受态细胞
产品说明
BL21(DE3)感受态细胞是采用大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受细胞,可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测,转化效率可达107,-70℃保存几月转化效率不发生改变。
BL21(DE3)菌株适合表达非毒性蛋白。该菌株是以T7 RNA 聚合酶为表达系统的外源基因蛋白高效表达的宿主。T7 噬菌体RNA 聚合酶基因的表达受λ噬菌体DE3区的lacUV5 启动子调控,该区整合在BL21 染色体上。本产品是大肠杆菌BL21(DE3)菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,可用于DNA的热击转化。使用pU19持粒检测,转化效率可达107。
基因型:fhuA2 [lon] ompT gal (λ DE3) [dcm] ?hsdS λ DE3 = λ sBamHIo ?EcoRI-B int::(lacI::PlacUV5::T7 gene1) i21 ?nin5
产品特点
1.转化效率可达107。
2.可用于非毒性蛋白表达。
3.长时间保存于-80 ℃,转化效率不发生改变
操作步骤
1.取感受态细胞置于冰浴中,放置10分钟。
2.向感受态细胞中加入1-5μl含有1pg-100ng的质粒DNA,轻轻地敲打4-5下。
3.冰浴30分钟,不要震荡。
4.42℃热击45秒,不要震荡,迅速转移到冰浴中,放置2分钟。
5.加入250μl室温的SOC培养基。
6.混匀后,置于37℃的摇床上,250rpm震荡培养60min。
7.将含有抗生素的平板加热到37℃,放置半个小时,使其表面干燥,易于均匀涂布。
8.根据实验要求,取适量转化的感受态的细胞,加到含有抗生素的固体琼脂糖培养基上(LB或SOC),用无菌棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃培养箱,倒置过夜培养(8-12h)。
运输和储藏
干冰运输,收到后请置于-80℃。
注意事项
1.刚刚融化的细胞,转化效率最高
2.避免反复冻融
3.避免用移液枪吸吹
4.整个操作过程要轻柔