产品详情
产品概述
DAPI染色试剂盒用于普通的细胞核染色,也可用于细胞凋亡检测以及某些特定情况下的双链DNA染色,染色后可用荧光显微镜检测或激光共聚焦或流式细胞仪检测。 DAPI (diamidino-2-phenylindole) 能与双链DNA小槽,特别是AT碱基结合,也可插入少于3个连续AT碱基对的DNA序列中。当它与双链DNA结合时,荧光强度增强20倍,而与单链DNA结合则无荧光增强现象,因此是一种简易、快速和敏感地检测DNA的方法。 DAPI的荧光强度较Hoechst低,但荧光稳定性优于Hoechst;其特异性较溴化乙啶和碘化丙啶高。
保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.长期不用可以-20℃保存。
2.染色液避免反复冻融。需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
3.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
6个月
检测方法
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
产品应用
1.流式细胞仪
2.激光共聚焦
3.荧光显微镜
试剂准备
1.PBS 缓冲液(pH7.4,实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1X))
2.或者HBSS(Hank's Balanced Salt Solution)
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
3.染色后立即进行分析。
4.染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。
5.本染色液可用于培养细胞、细胞涂片、石蜡切片、冰冻切片的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰丙酮固定后检测。
6.根据样本情况和下游的检测仪器选择合适的染色方法,只要在染色时染色工作液能充分覆盖细胞样本即可。
7.活细胞原位染色不同细胞需要的时间差异较大,可能需要较长时间,可将染液加入培养基后避光孵育30分钟-4小时,或更长时间。
8.以下以培养细胞的涂片的荧光显微镜检测为例,细胞染色不需要固定,也可以固定后染色。以下方法仅供参考,也可以请参阅相关资料使用其他方法。
使用方法
1. 染色工作液的配制:
根据样品数用PBS将DAPI染色液10-100倍稀释,配制成染色工作液。
2. 细胞爬片/涂片的制备:
贴壁细胞,可将盖玻片放于培养器皿中,让培养细胞长于玻片上,然后用药物诱导细胞凋亡后取出,用4%多聚甲醛固定5min。
对于悬浮细胞,用药物诱导细胞凋亡后,500-1000g离心5分钟收集细胞,用PBS洗2次,收集调整细胞数为1X105/ml,涂片或用离心涂片,用4%多聚甲醛固定5min;
3. 用PBS洗涤涂片两次。
4. 加适量染色工作液于涂片上,室温避光染色5-30分钟。
5. 吸除染色液。
6. 用1X洗涤液洗涤涂片。
7. 用荧光显微镜检测结果。
染料-DNA复合物的最da激发波长为360nm,最da发射波长为454nm。
结果分析 :
置于荧光显微镜下用360nm激发光观察结果:DAPI染色呈蓝白色荧光。
早期凋亡细胞呈现核浓缩,染色加深,或核染色质呈新月形聚集于核膜一边;晚期凋亡细胞表现为核碎裂成大小不等的圆形小体,并被细胞膜所包绕,即凋亡小体。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!