产品详情
产品概述
细胞衰老(Cell senescence)是细胞控制其生长潜能的保障机制,一般含义是复制衰老(Replicative senescence,RS),指正常细胞经过有限次数的分裂后,停止分裂,此时细胞虽然是存活的,但是细胞形态和生理代谢活性发生明显变化的现象。 体外衰老细胞研究常用的生物学特征包括:1)不可逆的生长停滞;2)与衰老相关的β-半乳糖苷酶(senescence associated β-galactosidase, SA β-gal)的活化。作为溶酶体内的水解酶,通常在pH 4.0的条件下表现活性。但是衰老细胞内其在pH 6.0的条件下表现活性,且随着传代次数的增加,细胞群体中表现衰老相关的β-半乳糖苷酶的细胞数目逐渐增加。 细胞衰老试剂盒正是基于SA β-gal活性变化的生物学特征而设计的,专门用于对衰老细胞或组织进行染色检测。本试剂盒以X-Gal为底物,通过细胞内SA β-gal在酸性条件下稳定表达,催化底物生成蓝色产物,从而在光学显微镜下观察颜色变化以分析细胞的衰老状况。 本试剂盒适用于人和各种动物体外培养细胞的衰老检测。产品性能稳定,参数经优化,着色敏感。仅对衰老细胞进行染色,不会染色衰老前的细胞(presenescent cells)、静止期细胞(quiescent cells)、永生细胞(immortal cells)或肿瘤细胞。
保存温度
2-8℃避光
注意事项
1.长期不用可以-20℃保存。
2.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
1年
检测方法
光学显微镜
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
产品应用
光学显微镜
试剂准备
1.PBS 缓冲液(pH7.4,实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1X))
2.或者HBSS(Hank's Balanced Salt Solution)
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
2.试剂A有腐蚀性,操作时要小心。
3.试剂C2刚溶解时可能会有沉淀,充分混匀或者漩涡震荡使沉淀全部溶解,之后用于染色实验
4.试剂C2需要避光保存。染色工作液也需要避免光照。
5.染色后的细胞样品可以在 4oC冰箱保存,需避免光照。
6.细胞β-半乳糖苷酶活性强,孵育3 h即显示阳性;细胞β-半乳糖苷酶活性弱,则需要孵育最长至24 h。细胞染色孵育时间应根据不同细胞样本情况经预实验后选定为 3-24 h。
7. 细胞衰老β-半乳糖苷酶染色反应依赖于特定的pH值,不能用于细胞培养的CO2培养箱中进行染色反应。因为CO2培养箱中较高浓度的CO2会影响染色工作液的pH值,导致染色失败。
8.避免使用细胞状态极差的细胞或过度传代的细胞,可能导致假阳性。
使用方法
1. 染色工作液配制
实验开始前,将试剂盒内各组分从冰箱内取出,置于室温回温15-20分钟。按以下染色工作液配方,根据实验体系类型,检测样本数,统一配制单次实验需要的染色工作液总量。混匀后,置入37oC恒温水槽里预热,即为染色工作液。
1.1 将染色剂C2粉剂用染色液C1充分溶解混匀。配成染色液C。
1.2 将300ul染色液C加入10ml染色液B中,充分混匀。配成染色工作液。
2. 细胞染色
2.1贴壁细胞:(96孔板为例)
1) 吸除细胞培养液,用0.1ml洗涤液E洗涤1次,加入0.1ml 固定液A,覆盖整个生长表面。室温固定5分钟。
2) 吸除固定液A,用PBS洗涤细胞3次,每次3分钟。
3) 吸除PBS,每孔加入0.1ml预热的染色工作液,覆盖整个生长表面。
4) 37℃孵育4小时~24小时,或直到细胞呈现蓝色,可以用封口膜或保鲜膜封住细胞培养板防止液体蒸发。
5) 普通光学显微镜下观察和计数:表达SA β-gal的细胞为阳性细胞,呈现蓝绿色。
2.2 悬浮细胞染色:
1) 离心收集细胞至1.5ml离心管内,用0.1ml洗涤液E洗涤1次,加入0.1ml 固定液A,覆盖整个生长表面。室温固定15分钟。固定时可以在摇床上缓慢摇动,以避免细胞结成团块。
2) 离心,吸除细胞固定液,用PBS洗涤细胞3次,每次3分钟。
3) 离心,吸除清洗液A,每管加入0.1ml预热的染色工作液。
4) 37℃孵育3 小时~15小时,或直到细胞呈现蓝色(注:避免液体蒸发)。
5) 取部分染色好的细胞,滴加到载玻片上或6孔板内,普通光学显微镜下观察和计数。
2.3 组织切片染色:
1) 对于石蜡切片先按照常规方法进行脱蜡或水化处理。对于冰冻切片直接按照以下步骤进行;
2) 加入适当体积的固定液A,以充分盖住组织为宜,室温固定不少于15分钟。
3) 用洗涤液E浸泡洗涤组织1次,用PBS洗涤2次,每次不少于5分钟;
4) 吸除PBS,加入适当量的预热的染色工作液。
5) 37℃孵育过夜,可以用封口膜或保鲜膜封住防止蒸发,也可以把整个切片浸泡在染色工作液中。
6)普通光学显微镜下观察和计数。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!