产品详情
产品概述
一氧化氮检测试剂盒是一种利用新型荧光探针O38进行细胞内一氧化氮定性检测的试剂盒。本试剂盒中的O38 NO探针为红色荧光的一氧化氮探针,具有510 nm / 610 nm的最大激发/发射波长。 O38 NO探针在细胞中一氧化氮存在的条件下,被氧化生成红色荧光物质,红色荧光强度与细胞内一氧化氮水平成正比,检测O38产物的荧光强度就可以知道细胞内一氧化氮的水平。 在激发波长510 nm,发射波长610 nm附近,使用荧光分光光度计、荧光酶标仪、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等检测O38产物的荧光强度,从而测定细胞内一氧化氮水平。 本试剂盒可以用于各种真核培养细胞的一氧化氮的定性检测。 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢(H2O2,Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH,Hydroxyl radical)、单线态氧(1O2,Singlet oxygen)、一氧化氮(NO,Nitric oxide)、超氧阴离子(•O2-,Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ,Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO• ,hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子(ONOO-,Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果,在呼吸链中,在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应,在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧:“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B),同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C),生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D),在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E),超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 O系列NO探针具有多种颜色可以选择,除了本试剂盒的红色荧光探针,还可以提供蓝色、绿色、深红色荧光的NO检测试剂盒。 可以为您提供各种细胞样本、切片样本、组织样本的活性氧、活性氮检测试剂盒产品。 可以为您提供总活性氧、总活性氮和各种亚型的活性氧/活性氮的检测试剂盒产品。 可以为您提供各种绿色、红色、蓝色、深红色的活性氧/活性氮检测试剂盒产品。
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.避免反复冻融。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液,在2-8℃时是固体状态,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
6个月
检测方法
1.流式细胞仪2.荧光显微镜3.激光共聚焦
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
产品特点
1.使用方便:可用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测或激光共聚焦显微镜直接拍照分析;
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
仪器准备
1.激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪,
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色96孔板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。2.荧光探针标记后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
3.探针标记完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
5.原位检测必须使用荧光检测专用的黑色透明底96孔细胞培养板。
6.以下操作步骤仅供参考,请根据实际样本情况调整或参考文献。? 7.探针标记的时间也可以根据情况在15-60分钟内适当进行调整。
8.标记的条件因细胞种类而异,根据不同样本的实际染色结果做相应调整,在每次实验前,请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化,确定最佳条件。以下染色操作条件仅供参考。请根据实际样本情况调整或参考文献。
9.酚红对O38荧光探针的检测有轻微干扰,需尽可能避免。
10.以下步骤仅做为参考,稀释比例和孵育时间可根据实际情况来调整。比如,对于某些细胞,如果发现未被刺激的阴性对照细胞荧光也比较强,可降低探针浓度。如果发现用感兴趣的药物刺激后荧光较弱,可升高O38探针浓度,以提高检测的灵敏度。另外,探针装载的时间也可以根据情况在15-60分钟内适当进行调整,孵育温度在4℃-37℃内调整。
使用方法
探针染色工作液配制:
根据样本数量,用HBSS将O38荧光染料1000-2000倍稀释,配制成探针染色工作液。
探针标记
原位标记:仅适用于贴壁培养细胞。
1. 培养板/培养皿准备细胞样本。
2. 待细胞生长到合适丰度,去除细胞培养基,用PBS洗细胞一次。
3. 加入适量体积37℃预热的含O38探针工作液。
4. 在37℃细胞培养箱内于生长状态下避光孵育20分钟~60分钟(具体孵育时间需根据细胞类型而定,需预实验优化)。
5. 移除染色液,用PBS(pH7.4)洗涤细胞3次。以充分去除未进入细胞内的O38探针。
6. 加入200 μL HBSS缓冲液。
7. 荧光酶标仪、荧光显微镜(含合适滤片)检测。最大激发/发射波长为510 nm / 610 nm。
收集后标记:悬浮细胞或贴壁细胞消化处理
1. 离心,吸除上清培养基。
2. 用PBS洗细胞一次。
3. 细胞收集后重悬浮于稀释好的37℃预热的O38探针工作液中,细胞浓度为1*106-2*107/毫升。
4. 于生长状态下37℃细胞培养箱内避光孵育20-45分钟(具体时间需根据细胞类型而定,需预实验优化)。每隔3-5分钟颠倒混匀一下,使探针和细胞充分接触。
5. 离心,吸除染色液,加入PBS(pH7.4)重悬细胞,洗涤3次。以充分去除未进入细胞内的O38探针。
6. 用HBSS/PBS/无血清细胞培养基重悬细胞。
7. 用荧光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪检测。
最大激发/发射波长为510 nm / 610 nm。
一氧化氮检测:
1. 对于原位标记探针的样品可以用荧光酶标仪检测,或者用激光共聚焦显微镜、荧光显微镜,直接拍照分析(需要有相关的荧光强度分析软件)。
2. 或收集细胞后标记探针然后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。
3. 对于收集细胞后标记探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测,用激光共聚焦显微镜直接拍照分析也可以(需要有相关的荧光强度分析软件)。
4. 使用510 nm激发波长,610 nm发射波长,实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱。
5. 荧光强度强,一氧化氮含量高。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!