产品详情
产品概述
超氧阴离子(O2•-)检测试剂盒是一种利用超氧阴离子特异性荧光探针O76进行超氧阴离子检测的试剂盒。 O76可自由透过活细胞膜进入细胞内,并被细胞内的超氧阴离子(O2•-)氧化,产生绿色荧光产物。绿色荧光强度与细胞内超氧阴离子水平成正比,检测O76产物的荧光强度就可以知道细胞内超氧阴离子的水平。 根据活细胞中绿色荧光强度的差异,可以判断细胞O2•-含量的多少和变化。是一种快速简便的培养活细胞中超氧阴离子检测方法。在激发波长506 nm,发射波长526 nm附近,使用荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、荧光分光光度计、荧光酶标仪、流式细胞仪等检测荧光,从而测定细胞内超氧阴离子(O2•-)水平。 本试剂盒可以用于各种真核培养细胞的超氧阴离子的快速定性检测。通过荧光强度的大小来快速确定具体的干预措施(如养分缺失、缺氧、药物治疗或遗传基因操控等)如何影响细胞的超氧阴离子变化,超氧阴离子增加的样本荧光强度大。 除了本绿色荧光检测试剂盒外,还可以提供红色荧光的超氧阴离子检测试剂(相关产品:BB-460672)。 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢(H2O2,Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH,Hydroxyl radical)、单线态氧(1O2,Singlet oxygen)、一氧化氮(NO,Nitric oxide)、超氧阴离子(•O2-,Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ,Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO• ,hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子(ONOO-,Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果,在呼吸链中,在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应,在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧:“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B),同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C),生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D),在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E),超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 可以为您提供各种细胞样本、切片样本、组织样本的活性氧、活性氮检测试剂盒产品。 可以为您提供总活性氧、总活性氮和各种亚型的活性氧/活性氮的检测试剂盒产品。 可以为您提供各种绿色、红色、蓝色、深红色的活性氧/活性氮检测试剂盒产品。
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.避免反复冻融。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液,在2-8℃时是固体状态,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
一年
检测方法
荧光酶标仪或荧光分光光度计
适用样本
新鲜组织
产品特点
1.使用方便:可用荧光酶标仪、荧光分光光度计检测;
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
仪器准备
1.荧光分光光度计或荧光酶标仪,
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.荧光检测专用黑色96孔板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。2.荧光探针标记后,一定要洗净残余的未进入细胞内的探针,否则会导致背景较高。
3.探针标记完毕并洗净残余探针后,可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描,以确认探针的标记情况是否正常。
4.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
5.原位检测必须使用荧光检测专用的黑色透明底96孔细胞培养板。
6.以下操作步骤仅供参考,请根据实际样本情况调整或参考文献。
使用方法
O76探针标记:
1.O76溶液可在新鲜无血清培养基、HBSS缓冲液、PBS缓冲盐溶液稀释到所需浓度,200-500倍稀释,以此染色工作液更换细胞培养基;也可直接向细胞孵育液体中加入O76探针溶液至所需浓度。
2. 依据细胞超氧阴离子含量的不同,O76终浓度可选择在200-500倍稀释的范围,孵育时间可选择10-90 分钟,在37℃或室温进行避光孵育。
3. 孵育结束后,用新鲜溶液清洗细胞。
4. 用相关仪器进行荧光检测。
对于原位标记探针的样品可以用激光共聚焦显微镜直接拍照分析,或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测。
对于收集细胞后标记探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测,用激光共聚焦显微镜直接拍照分析也可以。
使用488 nm激发波长,526 nm发射波长,实时或逐时间点检测刺激前后荧光的强弱变化。
荧光显微镜检测:
1. 对贴壁生长细胞,可直接在荧光显微镜下观察;对悬浮生长细胞,取25-50 μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上,再盖上一张盖玻片。
2. 荧光显微镜下,用蓝光或绿光激发,观察和拍摄细胞绿色发射图像,超氧阴离子阳性细胞在整个核区被染成绿色.
流式细胞仪分析:
1. 对贴壁生长细胞,用胰酶消化制备成单细胞悬液;对悬浮生长细胞,直接收集细胞。用0.5~1 ml冰冷PBS重悬细胞(5~10万)。
2. 采用480~535 nm波长激发,测定526 nm的发射,测定样本细胞的平均荧光强度值。
细胞可能分成两个亚群:超氧阴离子(O2•-)阴性细胞仅有很低的荧光强度,超氧阴离子阳性细胞有较强的绿色荧光。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!