产品详情
产品概述
组织切片一氧化氮(NO)检测试剂盒是一种利用NO特异性荧光探针O38进行NO检测的试剂盒。 O38是一种细胞膜通透性的荧光探针,本身荧光较弱,被NO特异性氧化生成红色荧光物质,红色荧光强度与NO水平成正比,检测红色荧光就可以知道组织内NO的水平。 在激发波长516 nm,发射波长606 nm附近,使用荧光显微镜/激光共聚焦检测红色荧光,从而测定样本内NO水平。利用本试剂盒可以快速定性检测样本内一氧化氮(NO)水平变化差异。 活性氧(Reactive oxygen species, ROS) 包括过氧化氢(H2O2,Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH,Hydroxyl radical)、单线态氧(1O2,Singlet oxygen)、一氧化氮(NO,Nitric oxide)、超氧阴离子(•O2-,Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ,Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO• ,hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子(ONOO-,Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等,参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。 活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果,在呼吸链中,在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应,在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧:“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2•-)(图1A)。超氧阴离子遇水生成H2O2(图1B),同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成(图1C),生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-(图1D),在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH•(图1E),超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-(图1F)。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。 一般最hao使用新鲜样本振动切片或者冰冻切片检测NO。石蜡切片样本的NO在蜡块的制作过程中会损失掉,不建议使用石蜡切片样本。已经制备好的石蜡切片样本中残余的NO也可以用本试剂盒检测。 有条件的话也可以采用直接用组织样本检测,不需要制备成切片的NO检测试剂盒。 除了红色荧光的NO检测试剂盒,也可以提供绿色、蓝色、深红色等其它颜色的检测试剂盒。 还可以为您提供各种组织、细胞样本、切片样本的活性氧、活性氮等各种颜色的检测试剂盒产品。 可以提供各种细胞检测试剂盒。包括细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的BBcellProbe® M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.避免反复冻融。
2.可以根据需要分装后冻存。
3.探针为DMSO溶液,在2-8℃时是固体状态,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
有效期
6个月
检测方法
荧光显微镜/激光共聚焦显微镜
适用样本
1.新鲜冰冻切片
2.振动切片
产品特点
1.使用方便:可用荧光显微镜直接观察;
2.背景低,灵敏度高;
3.线性范围宽,使用方便。
仪器准备
1.荧光显微镜/激光共聚焦显微镜
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
PBS缓冲液或者HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
4.黑色96孔板
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.尽量缩短探针标记后到测定所用的时间,以减少各种可能的误差。
3.对于某些样本,如果荧光太强,可以按照1:200-1:1000稀释探针。探针标记的时间也可以根据情况在20-60分钟内适当进行调整。
4.冰冻切片制作不需要经过固定脱水包埋等步骤,直接冷冻后切片贴片。
5.有条件也可以采用振动切片的方法。有些方便处理的样品类型也可以采用徒手切片。
6.以下操作步骤仅供参考,请根据实际样本情况调整。
使用方法
试剂配制
1. 根据样本数,用纯水将O38一氧化氮荧光探针200-1000倍稀释,配成染色工作液。
2. 用纯水将10X清洗液10倍稀释,配成1X清洗液工作液。
探针标记
1. 准备待测的厚为10 μm的未经固定处理的冰冻切片。
2. 室温下,小心加上200 μl清洗液工作液,铺满整个切片表面,静置5-10分钟。
3. 小心吸除清洗液。
4. 滴加100-200 μl染色工作液,在37℃培养箱避光孵育20-45分钟。
5. 移除染色液。
6. 用PBS洗涤切片2-3次。
7. 加盖玻片或甘油封片。
8. 荧光显微镜检测。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!