产品详情
产品概述
一氧化氮(Nitric Oxide,NO),是一种非常重要的生理性的细胞内及细胞间的信号分子,在免疫、神经及循环等系统中起着重要作用。一氧化氮化学性质活泼,体内代谢转化为硝酸盐(NO3-)和亚硝酸盐(NO2-),此两种浓度之和(NO3-+NO2-)才能准确代表NO水平。 一氧化氮检测试剂盒利用硝酸还原酶特异性将NO3-还原为NO2-,通过显色反应测定其浓度的高低。 本试剂盒测试灵敏度高、简便、稳定,可用于血清、组织匀浆、细胞及细胞培养液、腹水、胸水、脑脊液、胃液、尿液等样本的NO浓度测定。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。
保存温度
2-8℃ 避光
注意事项
1.开盖后组份按要求条件保存。
2.拆封后请尽快使用完!
有效期
3个月
检测方法
分光光度计
适用样本
血清、血浆、尿液、细胞培养上清、细胞裂解液、组织裂解液
仪器准备
1.分光光度计
2.恒温水浴锅
3.离心机
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
纯水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.因组织中NO含量较少,组织匀浆一般为10%或20%,且做好的组织匀浆离心速度为2500rpm/min,离心10分钟,转速不可过高,时间不可太长,样本取样量以0.3-0.5ml为宜。
2.试剂A、试剂B和标准品避免反复冻融,如果需要分多次实验,可以在第yi次实验时将试剂A和试剂B、标准品分装后再保存,根据每次实验时的试剂用量取出使用。
3.配好的显色剂避光保存。
4.血清、血浆、组织等样本应新鲜,或者于-80℃以下保存半年以内检测。
5.所有实验用水均需使用不含NO2-的纯水或双蒸水。
6.样本与底物反应完毕后,离心,取上清时千万不可将沉淀吸出,否者影响结果。
7.需使用一次性塑料试管,若没有,使用较新的玻璃管并彻底洗刷干净。
使用方法
试剂配制
1. 混合试剂的配制:
按试剂 A:试剂 B=1:1配制,用多少配多少,配好后充分混合后待用,现用现配,24小时内有效。
试剂 A,试剂 B使用前请放37℃水浴或室温使其溶解后混匀再用。
2. 试剂E工作液配制:
将试剂E加入90~100℃热双蒸水20 mL中,隔水加热充分溶解;4℃避光保存。
3. 试剂F工作液配制:
使用前将试剂F加入双蒸水8 mL中溶解后备用;4℃避光保存(如颜色变为深咖啡色不可再用)。
4. 显色剂配制:
使用前配制,用多少配多少。试剂 E工作液︰试剂 F工作液︰试剂 G=2.5︰1︰1。若能在一个月内用完者也可一次配成。剩余显色剂避光保存。室温较低时会有结晶析出,再次使用时,放100℃水浴,反复摇动溶解后使用。
5. 100μmoL/L标准工作液配制:
取0.1 mL标准品(10mmoL/L)用双蒸水定容稀释至10mL(即100倍稀释),混匀,即为100μmol/L标准应用液。现配现用。
样本处理
1. 血清、血浆等液体样本:直接测定
2. 组织:
按照组织质量(g):提取液体积(ml) =1:5-10 的比例(建议称取约0.1g 组织,加入1ml PBS或生理盐水(10%匀浆)进行冰浴匀浆,然后3000g ,4℃离心10分钟,取上清液待测。
1. 计算公式:
血清、血浆中NO含量计算:
NO含量 = 测定管吸光度值-空白管吸光度值 X 标准品浓度 X 样品测试前
(umol/L) 标准管吸光度值-空白管吸光度值 (100umol/L) 稀释倍数
2. 计算举例:
测人血清中NO含量,取人血清100μl进行检测,结果如下,测得空白管吸光度为0.080,标准管吸光度为0.169,测定管吸光度为0.109。血清未稀释,则稀释倍数为1,将数据带入计算公式:
NO含量(umol/L)=(0.109-0.080)/(0.169-0.080)*100umol/L*1=32.584umol/L
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!