产品详情
产品概述
F04细胞内钙离子染色试剂盒是利用F系列Ca2+钙离子荧光探针进行钙离子特异性染色的试剂盒。本试剂盒中的F04细胞内钙离子染色探针为绿色荧光标记的钙离子探针,具有505 / 525nm的最da激发/发射波长。 F04具有极高的细胞渗透性,经过简单孵育即可实现细胞加载。穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成不易透过细胞膜的F04新产物,从而被滞留在细胞内。F04游离配体几乎是非荧光性的,其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。但是,当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光,荧光会增加60至100倍,被激发后可以发出绿色的荧光,具有很高的淬灭常数和激发态寿命。最da激发波长为 505nm,最da发射波长为 525nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm左右,发射波长为 515~530nm。可以使用荧光显微镜、酶标仪、激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。 F04荧光探针采用可见光激发,与传统的紫外光激发的荧光探针相比,仪器的适用范围更广泛,具有更强的探针吸收性能,使得更低浓度的探针即可成功检测Ca2+变化,从而降低了对活细胞的光毒性,检测敏感度更高。 F系列钙离子探针具有多种颜色可以选择,可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的绿色荧光探针,还可以提供橙色等其他颜色的染色试剂盒。 可以提供细胞凋亡、增殖、毒性、活性氧、细胞代谢、氧化应激、细胞膜流动性、膜通透性转换孔、细胞耗氧率、细胞内pH、细胞粘附、细胞自噬等数百种检测试剂盒产品。 可以为您提供各种颜色的M系列、N系列、L系列、E系列、G系列等细胞膜、细胞质、细胞核、溶酶体、线粒体、内质网、高尔基体、骨架、微管等细胞、细胞亚结构荧光染色试剂盒产品,以及钙离子、钠离子、氩离子等各种荧光染色试剂盒产品。 可以提供动物、植物、微生物、酵母、水产、家禽、兽类、土壤等样本的各种生化指标检测的数百种试剂盒产品。 以96孔板每孔200ul染色液计,本试剂盒小包装可以染色50-500个样本。
保存温度
-20℃ 避光
注意事项
1.染料短期2周内可以2-8℃保存。染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
2.染色液A为DMSO溶液,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
4.试剂拆封后请尽快使用完
有效期
6个月
检测方法
1.流式细胞仪
2.荧光显微镜
3.激光共聚焦
适用样本
1.悬浮细胞
2.贴壁细胞
产品应用
流式细胞仪/荧光显微镜/激光共聚焦
仪器准备
1.激光共聚焦/荧光显微镜//光度计/流式细胞仪
2.离心机
3.移液器
4.冰箱
5.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 2.HBSS
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
2.F04染色液为DMSO溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
3.使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
4.细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
5.标记的条件因细胞种类而异,根据不同样本的实际染色结果做相应调整,在每次实验前,请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化,确定最jia条件。以下方法仅供参考。
6.染色后立即进行分析。
7.本染色液可用于细胞涂片、细胞的检测。
8.可以在染色溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液,Pluronic F127 可以帮助F04探针更快进入细胞,不建议在Pluronic F127中长期保存F04探针。
9.由于F04探针在水中的稳定性比较差,染色工作液必须现配现用,并且在当天用完。
10.F04探针对湿度比较敏感,每次取完需要量后,必须紧紧密封盖子。建议根据单次用量,分装密封保存。不可使用含水的吸头。
11.试剂A母液请拧紧螺旋盖,避免受潮失效。
使用方法
1. 染色工作液的配制:
根据样本数量,用37℃培养箱预热的HBSS将F04荧光染料200-1000倍稀释,配制成染色工作液。
2. 细胞染色
悬浮细胞染色
1) 用PBS洗涤细胞2次。
2) 加入适量体积的染色工作液重悬细胞,使其密度大约为1×106/mL。
3) 在37 ℃孵育细胞 20分钟,不同的细胞最jia培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
4) 加入 5 倍体积的含有1%胎牛血清的 HBSS,再继续孵育40分钟。
5) 孵育结束,500 g离心5分钟。
6) 弃上清液,再次缓慢加入37℃预热的HBSS重悬细胞。
7) 重复(5),(6)步骤两次。
8) 加入HBSS重悬细胞,在37℃下再继续孵育20分钟。
9) 然后用该细胞进行荧光钙离子检测。
贴壁细胞染色
1) 用PBS洗涤细胞2次。
2) 细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。
3) 37 ℃孵育细胞 20分钟,不同的细胞最jia培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
4) 吸干染色工作液,用HBSS洗培养板或盖玻片2~3次,每次用预热的HBSS覆盖所有细胞,然后吸干培养基。
5) 加入HBSS,在37℃下再继续孵育20分钟。
6) 然后用该细胞进行荧光钙离子检测。
3. 用荧光显微镜或流式细胞仪检测
激发波长为488nm,最da发射波长为525nm。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!