产品详情
产品概述
胞浆蛋白/核蛋白/组蛋白提取试剂盒提供全套试剂,适用于从各种原代或传代培养动物细胞和各种动物实体组织样品中提取胞浆蛋白/核蛋白/组蛋白。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白,下游应用范围广,提取液裂解细胞的能力较温和,需要根据实际样本情况优化裂解时间。 本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
动物细胞/组织
产品特点
1.使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.提取过程简单方便。
3.含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
5.总蛋白提取液含多种有效成分,可以充分释放胞浆蛋白、核蛋白和膜蛋白,又可结合释出的蛋白防止沉淀。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64,每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项:
? 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
? 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
? 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
? 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
? 如果试剂盒不能短时间内用完,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
? 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
? 下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测,提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂,注意提取过程保持低温操作,缩短离心时间。
使用方法
组织蛋白提取
1. 提取液制备:
每200ul蛋白提取液A中加入1ul蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
每200ul蛋白提取液B中加入1ul蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取适量组织样本,用手术剪刀尽可能剪碎,加冷PBS,用组织匀浆机/匀浆器匀浆至无明显肉眼可见固体,冰上静置5分钟,小心将上清吸入另一预冷的干净离心管。
3. 在4℃,500×g条件下离心5分钟,弃上清。
4. 每20-30ul细胞沉淀体积(20mg组织)中加入200μl冷的提取液 A,高速涡旋振荡15秒或吹打混匀,置2-8℃条件振荡20-30分钟。
5. 然后在4℃,5000×g条件下离心10分钟。
6. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到胞浆蛋白,请置于冰上或-80℃冰箱保存备用。
7. 沉淀用PBS洗涤一次,在4℃,5000×g条件下离心5分钟,弃上清。
8. 在沉淀中加入100-200μl冷的提取液B,高速涡旋振荡5秒。
9. 置2-8℃条件振荡30分钟。
10. 在4℃,16000×g条件下离心10-15分钟。
11. 将上清吸入另一预冷的干净离心管,即可得到核蛋白。留沉淀用于下步的组蛋白/染色质相关蛋白提取。
12. 在沉淀中加入100ul组蛋白提取液C,充分混匀。
13. 用200ul枪头反复吹打混匀或充分涡旋振荡混匀,置4℃冰箱过夜存放。
14. 在12000×g条件下离心10分钟,收集上清。
15. 在上清中加入10-20ul 试剂D充分混匀,即得到组蛋白。
16. 在组蛋白样品中加入上样缓冲液混匀后煮沸,分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!