谷氨酸合成酶（GOGAT）活性检测试剂盒说明书 

紫外分光光度法

规格：50T/48S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 工作液的配制：取试剂二、试剂三、试剂四各一支加入 30 mL 试剂一中溶解，现用现配，可分装后-20℃保存，避免反复冻融。

产品说明：

GOGAT 主要存在于原核生物、酵母菌及高等植物非绿色组织的前质体中，和谷氨酰胺合成酶（GS）共同构成 GS/GOGAT 循环，参与氨同化的调控。

GOGAT 以 NADH 为电子供体，催化谷氨酰胺的氨基转移到 α-酮戊二酸形成两分子的谷氨酸，NADH 在 340nm吸光度的下降速率可以反映 GOGAT 活性大小。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1、细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20%或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

2、组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1、 紫外分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2、 工作液提前配置，平衡至室温。

3、 样本测定

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！