产品详情
胃蛋白酶活性检测试剂盒说明书
紫外分光光度法
规格:50T/24S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
产品说明:
胃蛋白酶由胃粘膜主细胞分泌,分解食物中蛋白质成小肽段。一般用于神经性低酸症的鉴别,慢性胃炎、慢性胃扩张、慢性十二指肠炎等症状时也会引起胃蛋白酶分泌的减少。
胃蛋白酶可催化血红蛋白水解,水解产物酪氨酸在 275nm 下有特征吸收峰。通过测定吸光值的变化来计算酶活。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆或者 0.1mL 胃液加入 0.9mL 提取液。10000 rpm 4℃离心 10 分钟,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计预热30min以上,调节波长至275nm,蒸馏水调零。
2、 操作表:
注意:对照管后加样本,而测定管先加样本
三、 胃蛋白酶活性计算
1、按样本蛋白浓度计算
活性单位定义:37℃下每毫克蛋白每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。
胃蛋白酶酶活(U/mg prot)=(?A÷ε÷d×V 反总)÷(Cpr×V 样本)÷T=0.786×?A÷Cpr
2、按样本质量计算
活性单位定义:37℃下每克组织每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。
胃蛋白酶酶活(U/g 质量)=(?A÷ε÷d×V 反总)÷(W×V 样本÷V 提)÷T=0.786×?A÷W
3、按液体体积计算
活性单位定义:37℃下每毫升液体每分钟催化血红蛋白水解生成 1μmol 酪氨酸为一个酶活单位。
胃蛋白酶酶活(U/mL)=(?A÷ε÷d×V 反总)÷(V 样本÷V 提×V 液)÷T=7.86×?A
Cpr:样本蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;W:样本质量,g;V 反总:反应总体积,1.1mL;V 提:提取液体积,1mL;T:催化反应时间,10min;V 样本:加入样本体积,0.1mL;ε:酪氨酸吸光系数,1.4mL/μmol/cm;d:光程,1cm;V 液:液体体积,0.1mL。
实验实例:
1、 取 0.1g 小鼠胃加入 1mL 提取液充分研磨,10000rpm 4℃离心 10 分钟,取上清稀释 2 倍,置冰上,按照测定步骤操作,测得计算?A=A 测定-A 对照=1.234-1.199=0.035,按样本质量计算酶活得:胃蛋白酶酶活(U/g 质量)=0.786 ×?A ÷ W × 2(稀释倍数)=0.5502 U/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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