产品详情
纤维素酶(CL)活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
规格:50T/24S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
标准品:10mg 无水葡萄糖(干燥失重<0.2%)。临用前加入 1mL 蒸馏水溶解,配制成 10mg/mL 葡萄糖溶液备用,2-8℃可保存两周,或者用饱和苯甲酸溶液溶解,可保存更长时间。
产品说明:
CL(EC 3.2.1.4)存在于细菌、真菌和动物体内,能够催化纤维素降解,是一类可广泛应用于医药、食品、棉纺、环保及可再生资源利用等领域的酶制剂。
采用3,5-二硝基水杨酸法测定CL催化纤维素降解产生的还原糖的含量。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计、水浴锅、低温离心机,可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、细菌或细胞:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液,超声冰浴破碎细菌或细胞(功率 200w,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、组织:称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液,冰浴中匀浆。8000g ,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤
1、分光光度计预热30min以上,调节波长至540nm,蒸馏水调零。
2、标准品稀释表:将标准品用蒸馏水稀释至1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1、0mg/mL。
实验中每个标准管需50μL标准溶液。
3、加样表(在EP管中依次加入下列试剂):
三、CL活力计算
1、标准曲线的建立:
根据标准管的浓度(y,mg/mL)和吸光度 ΔA 标准(x,ΔA 标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将 ΔA
测定(x,ΔA 测定)带入公式计算样本浓度(y,mg/mL)。
2、按样本蛋白浓度计算
单位的定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
CL 活力(U/mg prot)=1000×y×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T=233×y÷Cpr
3、按样本质量计算
单位的定义:每 g 组织在反应体系中每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
CL 活力(U/g 质量)=1000×y×V 反总÷(W×V 样÷V 样总)÷T =233×y÷W
4、按细菌或细胞密度计算
单位的定义:每 1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化产生 1μg 葡萄糖定义为一个酶活力单位。
CL 活力(U/104 cell)=1000×y×V 反总÷(500×V 样÷V 样总)÷T =0.467×y
1000:单位换算系数,1mg/mL=1000μg/mL;V 反总:反应体系总体积,0.35mL;V 样:加入样本体积,0.05mL;V 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,30 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!