产品详情
土壤酸性磷酸酶(S-ACP)活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂二:用前加 100 mL 蒸馏水充分溶解,2-8℃保存 8 周;
2、 试剂四:临用前取 1 瓶加 576 μL 无水乙醇(自备),24 μL 蒸馏水充分溶解,用不完的试剂可以 2-8℃保存 2 周(变褐色后不能再使用,一瓶即可以实验 100T,为延长反应时间故多给一瓶);
3、 标准品:0.5 μmol/mL 苯酚标准液。
产品说明:
土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷矿化的酶,其活性的高低直接影响着土壤中有机磷的分解转化及其生物有效性,是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 显著影响,根据最适 pH 范围,通常分为酸性、中性和碱性三种类型。
酸性环境中,S-ACP 催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,通过测定酚的生成量即可计算出 S-ACP 活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、分析天平、研钵、可调式移液器、30-50 目筛、冰、蒸馏水、乙醇和甲苯(不允许快递)。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1. 新鲜土样自然风干或 37℃烘箱风干,过 30~50 目筛。
2. 称取风干混匀土壤约 0.1g,加入 0.05mL 甲苯(自备),轻摇 15min;加 0.4 mL 试剂一并且摇匀后,置于 37℃水浴锅/恒温培养箱,开始计时,催化反应 24h;到时间后迅速加入 1mL 试剂二充分混匀,以终止酶催化的反应。10000rpm 室温离心 10min,取上清液置于冰上待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长到 660nm,分光光度计蒸馏水调零。
2. 空白管:取微量玻璃比色皿/96 孔板,加入 10μL 试剂一,40μL 试剂三,4 μL 试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水 146μL,混匀后室温静置 30min,于 660nm 测定吸光度,记为 A 空白管。空白管只需做 1-2 次。
3. 标准管:取微量玻璃比色皿/96 孔板,加入 10μL 标准液,40μL 试剂三,4μL 试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水 146μL,混匀后室温静置 30min,于 660nm 测定吸光度,记为 A 标准管。标准管只需做 1-2 次。
4. 测定管:取微量玻璃比色皿/96 孔板,加入 10μL 上清液,40μL 试剂三,4μL 试剂四,充分混匀,显色后再加蒸馏水 146μL,混匀后室温静置 30min,于 660nm 测定吸光度,记为 A 测定管。
注意:空白管和标准管只需要测定 1-2 次。
三、S-ACP 活性计算
活性单位定义:37℃中每克土壤每天释放 1nmol 酚为 1 个酶活单位。
S-ACP(U/g 土样)=[C 标准液×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)]×V 总×1000÷W÷T
=725×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W
C 标准液:0.5 μmol/mL;V 总:催化体系总体积,1.45mL;W:土壤样本质量,g;T:催化反应时间,24h=1d;1000:单位换算系数,1μmol=1000nmol。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!