产品详情
半胱氨酸(Cys)含量检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1.试剂二:用前一天,向试剂二中加 2 mL 蒸馏水充分溶解,再加磷酸 0.5 mL,混匀后盖紧(防止水分散失)沸水浴 2h;冷却后加 8 mL 蒸馏水,4℃可保存 2 周。(一瓶即可做 100T,为延长试剂盒使用时间,故多给一瓶)
2.标准品:10 mg 半胱氨酸。将标准品加入 4.13mL 蒸馏水,可得到 20μmol/mL 的标准液。4℃可以保存 4 周。
产品说明:
蛋白质含有三种含硫氨基酸:甲硫氨酸、胱氨酸和半胱氨酸(Cys)。其中,Cys 是唯一一种含有巯基的含硫氨基酸,从甲硫氨酸转化而来,并且可与胱氨酸互相转化。Cys 参与蛋白质二硫键的形成,经常是蛋白质活性中心的组成部分,还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外,Cys 大量积聚在皮肤和粘膜表面,在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性,并且补充巯基,以维持皮肤的正常代谢,调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。
Cys 还原磷钨酸生成钨蓝,在 600nm 处有吸收峰;通过测定 600nm 吸光度,计算 Cys 含量。
技术指标:
最 低检出限:0.0066 μmol/mL
线性范围:0.03125-3 μmol/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备仪器和用品:
低温离心机、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、磷酸和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、 液体样本中半胱氨酸提取:取 0.2mL 液体样本,加提取液 0.3mL,充分混匀,11000rpm 4℃离心 10min,取上清液待测。
2、 组织中半胱氨酸提取:称取约 0.2g 组织,加入提取液 0.5mL,冰上充分研磨,11000rpm 4℃离心 10 min,取上清液待测。
二、测定步骤
1. 可见分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长到 600nm,蒸馏水调零。
2. 标准液的配制:用蒸馏水稀释为 2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625μmol/mL 浓度的标准溶液。
3. 按下表加入各试剂
三、半胱氨酸含量计算
注意事项:
如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!