产品详情
还原糖含量检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
标准品:10 mg 无水葡萄糖(干燥失重<0.2%)。临用前加入 1 mL 蒸馏水溶解备用,4℃可保存 2 周,或者用饱和苯甲酸溶液溶解,可保存更长时间。
产品说明:
还原糖广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。植物体内的还原糖主要包括葡萄糖、果糖和麦芽糖等,是最常见的单糖和双糖,其中葡萄糖和果糖不仅是呼吸作用的主要底物,也是进一步合成蔗糖、淀粉和纤维素的底物。
加热促进碱性溶液中 3,5-二硝基水杨酸溶液与还原糖生成棕红色氨基化合物,在 540nm 有特征吸收峰;在一定的浓度范围内,还原糖含量与 540nm 吸光度成线性关系,根据标准曲线,即可求出样本中还原糖的量。
技术指标:
最 低检出限:0.0616 mg/mL
线性范围:0.1-0.6 mg/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、离心机,可调式移液器、超声破碎仪,微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、 细菌或细胞的处理:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):试剂一体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 试剂一),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次),转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中 40min并且振荡 8~10 次,8000g,25℃离心 10min,取上清供测定用。
2、 组织的处理:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 试剂一),冰浴匀浆,转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中 40min 并且振荡 8~10 次,8000g,25℃离心 10min,取上清供测定用。
3、 血清(浆)的处理:按照血清(浆)体积(mL):试剂一体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议取 0.1mL 血清(浆)加入 0.9mL 试剂一),冰浴匀浆,转移到有盖离心管中(防止加热时水分散失),80℃水浴中 40min 并且振荡 8~10次,8000g,25℃离心 10min,取上清供测定用。
二、测定步骤
1. 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm,分光光度计蒸馏水调零。
2. 标准品准备:将标准品用蒸馏水稀释至 0.6、0.5、0.4、0.3、0.2、0.1 mg/mL。
3. 标准品稀释表
4. 在 EP 管中加入下列试剂:
三、还原糖含量计算
注意事项:
1. 每个测定管需设定一个对照管。
2. 如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!