产品详情
土壤蔗糖酶( S-SC)活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂一:自备甲苯;
2、 试剂三:临用前取 1 瓶加入 11 mL 蒸馏水充分溶解备用,用不完的试剂 2-8℃保存 2 周;
3、 标准品:含 10 mg 无水葡萄糖(干燥失重<0.2%)。临用前加入 1 mL 蒸馏水溶解备用,2-8℃可保存两周,或者用饱和苯甲酸溶液溶解,可保存更长时间。
产品说明:
S-SC 能够水解蔗糖变成相应的单糖而被机体吸收,其酶促作用产物与土壤中有机质、氮、磷含量,微生物数量及土壤呼吸强度密切关,是评价土壤肥力的重要指标。
S-SC 催化蔗糖降解产生还原糖,进一步与 3,5-二硝基水杨酸反应,生成棕红色氨基化合物,在 540nm 有特征光吸收,在一定范围内 540nm 光吸收增加速率与 S-SC 活性成正比。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅/恒温培养箱、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、30-50目筛、冰、研钵、甲苯(不允许快递)和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
新鲜土样自然风干或 37 度烘箱风干,研磨,过 30-50 目筛。
二、测定步骤
1. 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm,分光光度计蒸馏水调零。
2. 标准品准备:将标准品用蒸馏水稀释至 0.5、0.4、0.3、0.2、0.1mg/mL,可参考下表。
备注:实验中每个标准管需 85μL 标准溶液。
3. 加样表:
充分混匀,放入沸水浴中煮沸 5min(盖紧,缠封口膜以防止水分散失),流水冷却后充分混匀。
540nm 处蒸馏水调零,取 200μL 至微量玻璃比色皿或 96 孔板中,测定吸光值 A,分别记为 A 测定管、A 对照管、A 标准管、A 空白管。计算 ΔA=A 测定管-A 对照管(每个测定管需设一个对照管),ΔA 标准=A 标准管-A空白管。标准曲线和空白管只需测 1-2 次。
三、S-SC 活性计算
1、标准曲线的建立:
根据标准管的浓度(y,μmol/L)和吸光度 ΔA 标准(x,ΔA 标准),建立标准曲线。根据标准曲线,将 ΔA测定(x,ΔA 测定)带入公式计算样本浓度(y,μmol/L)
2、S-SC 活性计算:
单位的定义:37℃,每天每 g 土样中产生 1mg 还原糖定义为一个 S-SC 活力单位。
S-SC 活力(U/g 土样)= y×10×V 反总÷W÷T =100×y
10:稀释倍数;T:反应时间,1d;V 反总:反应体系总体积,0.3mL;W:样本质量,0.03g。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!