腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（AGP）活性检测试剂盒说明书

微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1. 试剂二：临用前每支加入 6.4 mL 双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存；

2. 试剂三：临用前加入 2 mL 双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存；

3. 试剂四：临用前每支加入 500 μL 双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂-20℃分装保存；

产品说明：

AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸与ATP反应生成淀粉合成的直接前体ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。

AGP催化的逆向反应生成G-1-P，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算AGP活性。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液，冰浴中匀浆。10000g ，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。

二、测定步骤

1．分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。

2．在 EP 管中按顺序加入下列试剂

三、AGP 活性计算

注意事项：

1、 如果一次性测定样本较多，可以将试剂一、二按比例配成混合液1，将试剂一、三、四和五按比例配成混合液2。

实验实例：

1、 取 0.1g 柳树加入 1mL 提取液冰浴中匀浆。10000g ，4℃离心 10min，取上清置冰上，之后按照测定步骤操作，用微量石英比色皿测得计算 ΔA=A2-A1=0.5784-0.4855=0.0929，按样本质量计算酶活得：

AGP 活性（U/g 质量）=380.5×ΔA÷W=353.48 U/g 质量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！