产品详情
二磷酸核酮糖羧化酶/加氧酶(Rubisco)活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂三:临用前加入 0.5 mL 蒸馏水充分溶解待用,振荡溶解后若出现浑浊可以离心使用;
2、 试剂四:临用前加入 1 mL 蒸馏水充分溶解待用;
3、 工作液的配制:临用前在试剂二中加入全部试剂一,充分混匀,在 25℃孵育 5min。
产品说明:
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、细菌或细胞样本的制备:收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提
取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);10000g 4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。
2、称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液,冰浴中匀浆。10000g,4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。建议选取新鲜的植物样本。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。
2、按下表步骤加样:
三、Rubisco 活性计算
实验实例:
1、 取 0.1g 植物叶片,加入 1mL 提取液进行匀浆研磨,取上清之后按照测定步骤操作,用微量石英比色皿测得计算 ΔA 测定管= A1 测定-A2 测定=1.2647-1.1825=0.0822,ΔA 空白管=A1 空白-A2 空白=0.8649-0.8502=0.0147,ΔA=ΔA 测定管-ΔA 空白管=0.0822-0.0147=0.0675,按样本质量计算酶活得:
Rubisco 活力(U/g 质量)=344×ΔA÷W=344×0.0675÷0.1=232.2 U/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!