抗坏血酸氧化酶（AAO）活性检测试剂盒说明书

 微量法

规格：100T/96S

产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致

溶液的配制：

1、 试剂二：临用前加入 10 mL 蒸馏水充分溶解。

产品说明：

AAO是定位于植物细胞壁的糖蛋白，属“蓝铜氧化酶”家族。细胞壁内的抗坏血酸和AAO与细胞壁的代谢和生长有着密切的联系。AAO氧化AsA所形成的MDHA可通过质膜上的细胞色素b还原，该过程中电子的跨膜运输能够促进细胞生长。

AAO可直接氧化AsA，通过测定AsA的氧化量，可计算得AAO活力。

注意：实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：

低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、可调式移液器、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

称取约 0.1g 样本，加提取液 1mL，冰上充分研磨，11000g 4℃离心 20min，取上清液待测。

二、测定步骤

1、 分光光度计/酶标仪预热30min，调节波长到265nm，蒸馏水调零。

2、 试剂一在25℃水浴锅中预热30min。

3、 按下表依次在微量石英比色皿/96孔板中加入试剂

三、AAO活性计算

注意事项：

由于试剂一中含有一定浓度的蛋白（约 1mg/mL），所以在测定样本蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量。

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！