产品详情
二胺氧化酶(DAO)活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否
溶液的配制:
1、 试剂二:液体置于试剂瓶内玻璃瓶中。临用前加入 4mL 蒸馏水溶解,4℃可保存 1 个月。
产品说明:
DAO (EC1.4.3.6)广泛存在于动物(肠粘膜、肺、肝脏、肾脏等)、植物和微生物中。催化多胺氧化为醛,其活性与核酸和蛋白合成密切相关,能够反映肠道机械屏障的完整性和受损伤程度。
DAO 催化尸胺产生醛和过氧化氢,外源添加过量的辣根过氧化物酶,催化过氧化氢氧化邻联茴香胺生成有色物质,在 500nm 处有特征吸收峰,通过测定该波长吸光度增加速率,计算 DAO 活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、蒸馏水、无水乙醇、水浴锅。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1. 组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g,4℃离心20min,取上清,置冰上待测。
2. 细菌、细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 血清等液体:直接测定。
二、测定步骤
1. 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 500nm,蒸馏水调零。
2. 操作表
三、酶活性计算公式
注意事项:
1、 如果 ΔA 小于 0.01,适当加大提取用样本质量;OD 值大于 0.8,样本可用提取液适当稀释,或者减少提取用样本质量。
2、 样本蛋白质含量需要另外测定。
实验实例:
1、 取 0.1g 肝脏加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 20min,取上清,置冰上,之后按照测定步骤操作,用 96 孔板测得计算 ΔA=A 测定-A 对照=0.135-0.125=0.01,按样本质量计算酶活得:
DAO(U/g 质量)=30×ΔA÷W=3 U/g 质量。
2、 取 0.1g 冬青加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃离心 20min,取上清,置冰上,之后按照测定步骤操作,用 96 孔板测得计算 ΔA=A 测定-A 对照=0.139-0.126=0.013,按样本质量计算酶活得:
DAO(U/g 质量)=30×ΔA÷W=3.9 U/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!