产品详情
尿素氮(BUN)含量检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂一:临用前加 5mL 蒸馏水充分溶解,现用现配,4℃可保存一周。
2、 试剂三:临用前将 A 液倒入 B 液中混合,或者根据比例(A:B=1:4)现用现配。
3、 标准品:10 mg 尿素。临用前加入 4.66 mL 蒸馏水配制成 1 mg/mL 尿素氮标准液。
产品说明:
尿素(BUN)是人体蛋白质代谢的主要终末产物,BUN构成了血液中绝大部分的非蛋白质氮,血液尿素氮是肾功能的主要指标之一。用靛酚蓝比色法测定脲酶水解尿素产生的NH3-N,生成的蓝色靛酚和尿素氮的浓度成正比。
技术指标:
最 低检出限:0.00009 μg/mL
线性范围:0.78125-100 μg/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、天平、研钵/匀浆器、低温离心机、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
组织:按照质量(g)﹕蒸馏水体积(mL)为 1﹕5-10 的比例(建议称取约 0.1g,加入 1mL 蒸馏水),冰上匀浆后于 4℃,13000g 离心 15min,取上清待测。
细菌或细胞:按照细胞数量(104个)﹕蒸馏水体积(mL)为 500-1000﹕1 的比例(建议 500 万个细胞加入 1mL蒸馏水),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3s,间隔 7s,总时间 3min);然后 4℃,13000g 离心 15min,取上清置于冰上待测。
血清(浆)或其它液体:直接检测。
二、测定步骤
1. 分光光度计/酶标仪预热30min,波长调至630nm,分光光度计蒸馏水调零。
2. 将1mg/mL尿素氮标准液用蒸馏水稀释至25μg/mL备用。
3. 加样表:
三、计算公式
1. 按样本质量计算:
尿素氮含量(μg/g 质量)=ΔA测定÷ΔA标准×C标准品×V提取÷W=25×ΔA测定÷ΔA标准÷W
2. 按蛋白浓度计算:
尿素氮含量(μg/mg prot)=ΔA测定÷ΔA标准×C标准品×V提取÷(Cpr×V提取)=25×ΔA测定÷ΔA标准÷Cpr
3. 按细胞数量计算:
尿素氮含量(μg/104 cell)=ΔA测定÷ΔA标准×C标准品×V提取÷细胞数量=25×ΔA测定÷ΔA标准÷细胞数量
4. 按液体体积计算:
尿素氮含量(μg/mL)=ΔA测定÷ΔA标准×C标准品=25×ΔA测定÷ΔA标准
C标准品:标准品浓度,25μg/mL;V提取:提取液体积,1mL;W:样本质量,g;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;细胞数量:以万计。
注意事项:
如果样本吸光值大于 1.5,建议将样本用蒸馏水稀释后进行测定。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!