产品详情
可溶性淀粉合成酶(SSS)活性检测试剂盒说明书
微量法
注意:本产品试剂有所变动,请注意并严格按照该说明书操作。
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 试剂四:临用前取 1 瓶加入 5 mL 试剂一溶解。
2、 试剂五:临用前加入 10 mL 试剂一溶解。
3、 试剂六:临用前取 1 支加入 208 μL 双蒸水,充分溶解备用,用不完的试剂 4℃保存。
4、 试剂七:可分装后-20℃保存,不可反复冻融。
5、 试剂八:临用前取 1 瓶加入溶解好的 4 mL 试剂四。
6、 反应液Ⅰ:临用前在试剂二中加入 14 mL 试剂一,缓慢加热,逐渐升温至水沸腾使其溶解,冷却后加入试剂三混合溶解。
产品说明:
SSS(EC 2.4.1.21)通常以游离态存在于质体基质中,催化淀粉链延长,主要负责支链淀粉的合成。
SSS 催化 ADPG 与淀粉引物(葡聚糖)反应,将葡萄糖分子转移到淀粉引物上,同时生成 ADP,在反应体系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和 6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化 NADP+还原为 NADPH,NADPH 生成量与前一步反应中 ADP 生成量呈正比,340nm 下测定 NADPH 增加量即可计算 SSS 活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液枪、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
粗酶液制备:称取约 0.1g 组织加入 1mL 提取液,冰浴中匀浆。10000g,4℃离心 10 分钟,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤
1. 紫外分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
2. 样本测定:在EP管内按顺序加入
三、SSS 活性计算
实验实例:
1、 取约 0.1g 肝脏加入 1mL 提取液,冰浴中匀浆。10000g ,4℃离心 10 分钟,取上清置冰上待测。之后按照测定步骤操作,用微量石英比色皿测得计算 ΔA=A2-A1=0.3809-0.1959=0.185,按样本质量计算酶活得:
SSS 活性(U/g 质量)=43.2×ΔA÷W=79.92 U/g 质量。
2、 取约 0.1g 冬青加入 1mL 提取液,冰浴中匀浆。10000g ,4℃离心 10 分钟,取上清置冰上待测。之后按照测定步骤操作,用微量石英比色皿测得计算 ΔA=A2-A1=1.3654-1.3601=0.0053,按样本质量计算酶活得:
SSS 活性(U/g 质量)=43.2×ΔA÷W =2.2896 U/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!