产品详情
组织及血液酸性磷酸酶(ACP)活性检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/48S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、 标准品:10μmol/mL 酚标准液,临用前蒸馏水稀释至 2.5μmol/mL 备用。
产品说明:
ACP 在酸性条件下催化磷酸单酯水解称无机磷酸,常见于巨噬细胞的溶酶体内。ACP 常用于前列腺癌的辅助诊断。
在酸性环境中,ACP 催化磷酸苯二钠水解生成苯酚,苯酚与 4-氨基安替比林和铁氰化钾反应生成红色亚醌衍生物,在 510nm 有特征光吸收;通过测定 510nm 吸光度增加速率,来计算 ACP 活性。
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
组织样本:称取约 0.1g 组织,加提取液 1mL 充分研磨,4℃,10000rpm 离心 10min,取上清液待测。
血浆(血清):血液可直接用于测定,如果浓度高的话,用提取液稀释。
二、测定步骤
1、分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长到 510nm,蒸馏水调零。
2、试剂一置于 37℃水浴中预热 30min 以上。
3、操作表:
三、ACP 活性计算
注意事项:
1、 试剂一、试剂二和试剂三均需避光保存。
2、 试剂三变蓝绿色后不能再使用。
3、 加入试剂三后必须立即混匀,否则显色不完全。
4、 ACP 不稳定,尤其在 37℃和 pH 大于 7 的条件下活力丧失快,因此酸性磷酸酶样本一般需当天准备;血清样本中,每毫升血清中加入 10mg 柠檬酸氢二钠或者 5mg 硫酸氢钠,使 pH 降至 6.5 以下,或 5mL 血清加入 30%醋酸溶液 2~3 滴,置于 4℃可保存 1 周。
实验实例:
1、 取 0.1g 肝脏加入 1mL 提取液进行匀浆研磨,取上清后按照测定步骤操作,使用 96 孔板测得计算 A 测定管=0.375、A 对照管=0.054、A 空白管=0.047、A 标准管=0.340,按样本质量计算酶活:
ACP 酶活(U/g 质量)=0.167×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W =0.167×(0.375-0.054)÷(0.340-0.047)÷0.1=1.830 U/g 质量。
2、 取 0.1g 三叶草叶加入 1mL 提取液进行匀浆研磨,取上清后按照测定步骤操作,使用 96 孔板测得计算 A 测定管=0.079、A 对照管=0.051、A 空白管=0.047、A 标准管=0.340,按样本质量计算酶活:
ACP 酶活(U/g 质量)=0.167×(A 测定管-A 对照管)÷(A 标准管-A 空白管)÷W =0.167×(0.079-0.051)÷(0.340-0.047)÷0.1=0.160 U/g 质量。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!