产品详情
丙酮酸(PA)含量检测试剂盒说明书
微量法
规格:100T/96S
产品组成:使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致
溶液的配制:
1、标准液:丙酮酸钠,1 mg/mL。
产品说明:
丙酮酸通过乙酰 CoA 连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢,起着重要的枢纽作用。
丙酮酸与 2,4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,在碱性溶液中呈樱红色。
技术指标:
最 低检出限:0.1510 μg/mL
线性范围:0.78125-50 μg/mL
注意:实验之前建议选择 2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
需自备的仪器和用品:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。
操作步骤:
一、样本处理(可适当调整待测样本量,具体比例可以参考文献)
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细菌或细胞加入1mL 提取液),超声波破碎(冰浴,功率20%或200W,超声3s,间隔10s,重复30次),静置30min,8000g,常温离心10min,取上清待测。
2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆,静置30min,8000g,常温离心10min,取上清待测。
3、血清(浆)样本:按照血清(浆)体积(mL):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议取0.1mL血清(浆)加入1mL 提取液),进行冰浴匀浆,静置30min,8000g,常温离心10min,取上清待测。
二、测定步骤
1、 分光光度计/酶标仪预热30min以上,调节波长至520nm,蒸馏水调零。
2、 标准品的准备:将标准品用蒸馏水稀释至25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.78125、0μg/mL。
3、 在微量玻璃比色皿或 96 孔板中加入 75μL 标准液或样本和 25μL 试剂一,混匀,静置 2min,加入 125μL 试剂二,混匀,于 520nm 波长处测定吸光值 A。
三、丙酮酸含量计算
注意事项:
如果测定吸光值超过线性范围吸光值,可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!